Question

【题目】如图表示构建均由35S启动子驱动的CMO基因与BADH基因的植物双基因表达载体，图中标注了相关限制酶的酶切位点，35S表示启动子及其方向．Nos表示终止子，hpt表示潮霉素抗性基因．请据图分析回答：
（1）从功能上分析，35S是识别和结合的部位，Nos的功能主要是 ．
（2）过程①应利用两种限制酶切割，酶切后回收载体A的大片段和CMO基因片段，加入含有酶的缓冲液，获得载体C．进而在过程②中，利用两种限制酶切割载体C和载体D，获得载体E．
（3）利用冻融法将载体E导入农杆菌中，制备成菌液LB．将无菌烟草叶片切成0.4cm2大小，加入到菌液LB中浸泡10min，以便 ． 用无菌滤纸吸干叶片表面菌液，注入MS培养基，暗培养3d后转入到含有的培养基中，筛选培养出含载体E的烟草若干株．
（4）利用DNA分子杂交技术检测发现呈阳性的烟草植株，再进一步利用抗原﹣抗体杂交方法检测到均有表达的烟草植株．

Answer 1

【答案】
（1）RNA聚合酶；终止转录
（2）SacⅠ、SmaⅠ； DNA连接； HindⅢ、BstEⅡ
（3）充分导入目的基因；潮霉素
（4）CMO基因与BADH基因
【解析】解：（1）分析题干信息可知，从功能上分析，35S是启动子，启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位；Nos表示终止子，因此Nos的功能主要是终止转录．（2）分析图解可知，过程①应利用SacⅠ、SmaⅠ两种限制酶切割目的基因和载体A，酶切后回收载体A的大片段和CMO基因片段，加入含有DNA连接酶的缓冲液，获得载体C．在过程②中，要用相同的限制酶切割目的基因和载体C，因此需要利用HindⅢ、BstEⅡ两种限制酶切割载体C和载体D，获得载体E．（3）利用冻融法将载体E导入农杆菌中，制备成菌液LB．将无菌烟草叶片切成0.4cm2大小，加入到菌液LB中浸泡10min，以便充分导入目的基因．根据题意可知，“hpt表示潮霉素抗性基因”，该基因作为运载体上的标记基因，因此培养基中应该加入潮霉素．（4）利用DNA分子杂交技术检测发现呈阳性的烟草植株，再进一步利用抗原﹣抗体杂交方法检测到CMO基因与BADH基因均有表达的烟草植株．

所以答案是：（1）RNA聚合酶 终止转录（2）SacⅠ、SmaⅠDNA连接 HindⅢ、BstEⅡ（3）充分导入目的基因 潮霉素（4）CMO基因与BADH基因

【考点精析】利用基因工程的原理及技术对题目进行判断即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重组技术．