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    【题目】胚胎工程和基因工程目前在生物技术中发展较快，请回答下列问题：

    （1）在哺乳动物的核移植实验中，一般通过 (物理方法)将受体细胞激活，使其进行细胞分裂并发育，当胚胎发育到 阶段时，将胚胎植入另一雌性(代孕)动物体内。

    （2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行 处理。另外，培养的卵母细胞需要发育至 ，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体。

    （3）利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞进行核移植的原因是 。

    （4）若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、 、终止子、标记基因和复制原点等。目前常用的措施是将该基因表达载体导入牛的 ，导入方法是_________________。

    【答案】

    （1）电脉冲(或电刺激) 桑椹胚或囊胚

    （2）获能(1分) MII中期(或减数第二次分裂中期)

    （3）体细胞分化程度高，不容易恢复全能性

    （4）人干扰素基因(或目的基因) 受精卵 显微注射法

    【解析】

    试题分析：

    （1）在哺乳动物的核移植实验中，一般通过电脉冲（或电刺激）将受体细胞激活，使其进行细胞分裂并发育；当胚胎发育到桑葚胚或囊胚阶段时，将胚胎植入另一雌性（代孕）动物体内。

    （2）体外受精时，需要对精子进行获能处理。培养的卵母细胞需要发育至MⅡ中期（减数分裂第二次分裂中期）才能与获能的精子受精。

    （3）由于体细胞分化程度高，不容易恢复全能性，因此利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞进行核移植。

    （4）若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、人干扰素基因（或目的基因）、终止子、标记基因和复制原点等。培育转基因动物时，常以受精卵为受体细胞；将目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法。

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    （3）将培养基上的酵母菌菌株转接到 的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA，经PCR技术获得目的基因，PCR技术获得同一种目的基因的原理是 。

    （4）将目的基因连接到质粒上，该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏 能力的酿酒酵母作为受体菌。

    （5）将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以葡萄糖和木糖为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能 ，即说明所需菌株培育成功。

    【现代生物科技】

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