Question

【题目】下图所示为农杆菌转化法示意图。据图请回答下列问题：

（1）基因工程的基本原理是____。要获得图中的重组质粒过程用到的3种工具的本质是____（填“都是蛋白质”或“蛋白质或核酸”或“都是核酸”）。

（2）图中外源基因的黏性末端的形成与___ 酶的作用有关，基因工程中所用的目的基因可以是____，也可以从____中获得。

（3）为使外源基因在此植物细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的外源基因片段正确插入表达载体的____之间。

（4）图中表示基因工程最核心步骤的是____（写数字）；在基因表达载体中，标记基因的作用是_____。

Answer 1

【答案】基因重组 蛋白质或核酸 限制性核酸内切 人工合成 基因文库 启动子和终止子 ② 便于重组载体（目的基因表达载体）的鉴定和筛选

【解析】

（1）获得目的基因的方法：①从基因文库中获取、 ②利用PCR技术扩增、 ③人工合成（化学合成）。原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。

（2）DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。

（3）目的基因的检测与鉴定，常用基因探针——用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因DNA片段。Ⅰ、分子水平上的检测： ①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术；Ⅱ、个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）基因工程利用的基本原理是基因重组。图中重组质粒用到的工具包括限制性核酸内切酶、DNA连接酶和运载体质粒，前两者本质是蛋白质，后者是核酸。

（2）用同种限制性核酸内切酶切割质粒和目的基因露出相同的黏性末端。目的基因的获取方法包括从基因文库中获取和PCR技术扩增。

（3）基因表达载体包括启动子、终止子、目的基因和标记基因，启动子位于目的基因的首端，终止子位于目的基因的尾端。

（4）基因工程最核心的步骤是表达载体的构建，即图中的②。表达载体上的标记基因用于重组载体（目的基因表达载体）的鉴定和筛选。