Question

(9分)小立碗藓是一种苔藓植物，易培养，被广泛应用于生物学实验研究，又因其同源重组的效率很高，已成为研究基因功能的良好材料。请回答下列问题：

(1) 甲同学在使用高倍镜观察小立碗藓的叶绿体时，发现在适宜条件下细胞中的叶绿体长时间静止不动，最可能的原因是__________________________。

(2) 乙同学用小立碗藓进行了如下实验操作：

步骤一：在洁净的载玻片中央加一滴清水，放置一片小立碗藓的小叶，盖上盖玻片。

步骤二：从盖玻片一侧滴入0.3 g/mL的蔗糖溶液，在盖玻片的另一侧________，这样重复几次。

步骤三：在显微镜下观察，若发现叶绿体向细胞中间聚拢，说明____。

(3) 同源重组在细胞中可自然发生，交叉互换的位点必须发生在特定的同源序列中，原理如图1所示。已知由硫酸盐降解酶(K基因编码)催化某种硫酸盐(APS)的降解是高等植物中硫酸盐利用的关键步骤。有人提出，植物体中还存在着该硫酸盐降解的支路(PAPS)，但不能确定其相关酶是否在植物体中存在。科研人员利用小立碗藓进行了以下研究：

图1 图2

① 测定K基因两侧的碱基序列。若测得在序列“5′…CGACCCGGGAGT…3′”中含有一个6个碱基对的限制酶SmaⅠ的识别序列，可推知该酶的识别序列为________。

② 质粒pcDNA3上有Neo基因(新霉素抗性基因)和限制酶Sma Ⅰ、Tth11 Ⅰ和Bsm Ⅰ的酶切位点，如图2所示。为了使Neo基因能与K基因发生同源重组，应选用限制酶________将Neo基因从质粒上切下来，然后在该基因的两侧增加与K基因两侧相同的________，构建具有Neo基因的表达载体。

③ 制备小立碗藓的原生质体，将其放在________溶液中，利用聚乙二醇介导直接将Neo基因表达载体导入小立碗藓细胞内。

④ 在添加了________的培养基中培养上述小立碗藓细胞，若能够发育成完整的植物体，则表明该植株已没有K基因。若通过此转化途径得到的植株________，说明在小立碗藓中存在PAPS支路。

Answer 1