Question

【题目】超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内重要的抗氧化酶，具有延缓衰老的功效。科研人员采用农杆菌介导转入法将携带SOD基因的Ti质粒导人胡萝卜细胞中，成功培育出SOD基因的胡萝卜新品种。回客下列问题:

（1）Ti质粒是基因工程中常用的载体之一，作为运载体必须具备的条件________（至少答两点）

（2）________________________________是基因工程的核心步骤，在该步操作中需要将SOD基因与Ti质粒的_________________区段结合。需要用________________________酶，并且将SOD基因置于_____________和______________之间。最终是否整合到胡萝卜的某染色体上,可用可用________________________方法来鉴定，或直接测定该染色体的DNA序列

Answer 1

【答案】能自我复制基因表达载体的构建；有一个至多个限制酶切割位点；有特殊的标记基因 基因表达载体的构建 T-DNA 限制酶和DNA连接酶 启动子 终止子 DNA 分子杂交

【解析】

1、质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。

2、作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点；②要有标记基因(如抗性基因),以便于重组后重组子的筛选③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。

3、基因工程的步骤：①获取目的基因（从基因组文库中获取或、利用PCR技术扩增目的基因）②基因表达载体的构建（这也是基因工程的核心）③将目的基因导入受体细胞（植物、动物、微生物）④目的基因的检测与鉴定 （DNA分子杂交技术,分子杂交技术、抗原抗体杂交）。

(1)质粒作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点；②要有标记基因(如抗性基因),以便于重组后重组子的筛选③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。

(2)基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建, 在该步操作中需要将SOD基因与Ti质粒的T-DNA区段结合。目的基因与运载体结合用到了限制酶和DNA连接酶。基因表达载体的构建是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代使目的基因能够表达和发挥作用，一个基因表达载体的组成是目的基因+启动子+终止子+标记基因。检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。