Question

20．Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的细胞核．
（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团分离出ES细胞．
（3）步骤③中，需要构建含有基因Rag₂的表达载体．可以根据基因Rag₂的核苷酸序列设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有Hindlll和PstI酶的酶切位点．
（4）步骤④在特定的诱导下ES细胞成功分化为造血干细胞其原因是选择性表达的结果．
（5）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验．

Answer 1

分析 分析题图：①表示核移植过程；②表示早期胚胎培养过程；③表示将目的基因导入ES细胞．④体外诱导ES细胞分裂分化造血干细胞，然后进行造血干细胞移植．

解答 解：（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核．
（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期，可从其内细胞团分离出ES细胞．
（3）步骤③是将目的基因导入ES细胞，该过程之前需要构建基因表达载体；可以根据基因Rag₂的核苷酸序列设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有Hindlll和Pst I酶的酶切位点．
（4）步骤④在特定的诱导下ES细胞成功分化为造血干细胞，而分化的实质是基因的选择性表达．
（5）为检测Rag₂基因是否表达，可以采用抗原-抗体（Rag₂蛋白）杂交法．
故答案为：
（1）细胞核
（2）囊胚 内细胞团
（3）核苷酸序列   Hindlll和Pst I
（4）选择性表达
（5）蛋白质

点评 本题以基因治疗的流程图为载体，考查了基因工程、细胞工程以及胚胎工程等方面的知识，难度适中．考生要能够识记细胞核移植的过程；识记囊胚包括内细胞团和滋养层两部分；明确基因工程中质粒和目的基因需要利用同种限制酶进行切割；掌握目的基因检测和鉴定的一般方法等．