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    4．转基因抗病香蕉的培育过程如图所示，质粒上有Pst I、Sma I、EcoR I、Apa I等四种限制酶切割位点．请回答：

     （1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ对含抗病基因的DNA和质粒进行切割，再用DNA连接酶将二者“缝合”．
    （2）将目的基因导入植物细胞常用方法有多种，除图中所示方法外还有基因枪法法和花粉管通道法法．
    （3）能使抗病基因在香蕉细胞中特异性表达的调控序列是AB（填字母序号）．
    A．启动子 　B、终止子　C．复制原点 　D、标记基因
    （4）利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株．培养基中除了含有一定的营养物质外还必须含有生长素和细胞分裂素等植物激素，它们会在①和②（填图中标号）阶段发挥作用．对植株进行抗病接种实验属于个体生物学水平的鉴定．

    分析 分析题图：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，其中SmaⅠ酶的切割位点位于抗病基因（目的基因）上；质粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位点．所以要活动重组质粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ进行切割．①表示脱分化过程、②表示再分化过程、④是新植体．

    解答 解：（1）含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，但限制酶SmaⅠ的切割位点位于抗病基因上，对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构，所以要获得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割．要获得含抗病基因的重组质粒，应选用PstⅠ、EcoRⅠ限制酶切割质粒和含目的基因的外源DNA分子．
    （2）将目的基因导入植物细胞的方法有：农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法．图中采用的是最常用的农杆菌转化法．
    （3）启动子和终止子能启动目的基因的转录与终止，是使抗病基因在香蕉细胞中特异性表达的调控序列．
    （4）植物组织培养的培养基中需要的植物激素是：生长素和细胞分裂素，在①脱分化和②再分化中发挥重要作用，在②再分化过程中需要给予一定的光照，利用芽的分化．对植株进行抗病接种实验属于个体水平的鉴定．
    故答案：
    （1）PstⅠ、EcoRⅠDNA连接酶
    （2）基因枪法    花粉管通道法
    （3）AB
    （4）生长素和细胞分裂素      ①和②个体生物学水平

    点评 本题结合转基因抗病香蕉的培育过程图，考查基因工程和植物组织培养技术的相关知识，意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点的能力；能运用所学知识与观点，对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论．

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