Question

【题目】HIV(艾滋病病毒)为逆转录病毒，而逆转录酶缺乏校正修复功能，因由HIV的变异频率作常高。因此，研制安全、有效的疫苗是控制HIV传播的重要手段之一。请根据相关知识回答下列问题：

(1)科学工作者利用转基因技术研制HIV疫苗取得了一定进展，下图是该技术的操作简要路径(①②③表示操作步骤)：图中②表示__________，目的基因的载体有________(答出三种)，要检测目的基因是否插入酵母菌的DNA，可采用______技术，利用探针检测酵母菌的基因，如果出现_____________，就表明目的基因己插入酵母菌DNA中。

(2)在基因工程中将重组质粒导入不同的受体细胞可采用不同的方法，若是导入植物细胞，采用最多的方法是___，若是导入大肠杆菌，一般情况下，需要制备感受态细胞，原因是_________________。

Answer 1

【答案】基因表达载体的构建 质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等 DNA分子杂交 杂交带 农杆菌转化法 未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱

【解析】

1、基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原——抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

2、艾滋病的致病原理：HIV病毒进入人体后，与人体的T淋巴细胞结合，破坏T淋巴细胞，使免疫调节受到抑制，使人的免疫系统瘫痪，最后使人无法抵抗其他细菌、病毒的入侵，让人死亡。

3、分析图示：①是获取目的基因的过程，②是基因表达载体的构建过程，③是将目的基因导入受体细胞的过程。

（1）基因工程的操作步骤：获取目的基因、基因表达载体的构建、把目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。图中②表示构建基因表达载。在基因工程中使用的载体有质粒、噬菌体衍生物、动植物病毒等。要检测目的基因是否插入受体细胞内的DNA上，检测方法是采用DNA分子杂交技术，利用含有放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段做为探针检测受体细胞的基因，如果出现杂交带，就表明目的基因已插入受体细胞DNA中。

（2）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，农杆菌能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，将质粒上的T-DNA转移到受体细胞。大肠杆菌属于微生物，由于未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱，作为受体细胞需要经过钙离子处理使其处于感受态，感受态细胞容易吸收周围环境中的DNA。