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    下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题。

    资料1 巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达[5'AOX1和3'AOX1(TT)分别是基因AOX1的启动子和终止子]。

    资料2 巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，可以将目的基因整合于染色体中以实现表达。

    （1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上 、 限制酶识别序列， 这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。

    （2）酶切获取HBsAg基因后，需用 将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取 。

    （3）步骤3中应选用限制酶 来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。

    （4）为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用 方法进行检测。

    （5）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入 以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。

    （6）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行 并分泌到细胞外，便于提取。

    练习册系列答案
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    B．①处有DNA聚合酶参与，②处没有DNA聚合酶参与

    C．①②两处都有生物大分子的合成，图中DNA可以与有关蛋白质结合成染色体

    D．DNA上的脱氧核苷酸序列均可以控制如图过程

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    （3）检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，在分子水平上的检测方法是________。

    （4）胚胎工程最后一道工序的实质是________________________________________。

    （5）为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术,应该选用________________的桑椹胚或囊胚进行分割。

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    A.(Se- Sd)• (Td - Te) =(Sd- Sc) • (Te - Td)

    B.(Se - Sd) . (Ta - Tb) =(Sa - Sb)• (Te -Td)

    C.Sb • Td = Sd • Tb

    D.Sc • Tb = Sb • Tc

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    ③若Ⅲ-10与Ⅲ-13婚配，所生孩子完全正常的概率是 ，生一种病的概率是 。

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    D．若ADH基因仅一条母链上的G被A所替代，则该基因连续复制n次后，突变型ADH基因占的比例为1/2n

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