Question

【题目】铁硫簇是一种氧化还原蛋白，它参与电子传递、基因表达和调控等重要过程。嗜热杆菌铁硫簇中有三种关键蛋白SufB、SufC、SufD，为研究三种蛋白能否相互作用，科研人员做了下面的研究。

（1）微生物培养过程中，若实验室保存的嗜热杆菌被大肠杆菌污染，可将菌种接种到LB细菌通用培养基上后，_____________，将嗜热杆菌筛选出来。

（2）提取嗜热杆菌基因组作为体外扩增的___________，加入__________种不同的引物，扩增出蛋白SufB、SufC、SufD的基因，作为目的基因。

（3）为获得sufBC融合基因，需要选择图1中的__________端，使其带上相同的酶切位点后，利用_____获得sufBC融合基因。

（4）图2中将构建好的重组质粒sufBC-PET28a导入受体细胞X。受体细胞最好选择______(酵母菌或大肠杆菌）。

（5）筛选含有目的基因的受体细胞X扩大培养，并诱导其表达融合蛋白SufBC。将融合蛋白与固体基质相连，再加入SufD蛋白，混合摇匀，然后洗去未结合的SufD蛋白。最后将固体基质上的蛋白洗脱下来进行电泳，结果如图3所示，这说明__________________。

Answer 1

【答案】高温培养 模板 6 b、c 限制酶和DNA连接酶 大肠杆菌 SufBC融合蛋白和SufD蛋白有相互作用（这一作用较弱）

【解析】

有关PCR技术的相关知识：
1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。
2、原理：DNA复制。
3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一对引物。
4、过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开。

（1）分析题意可知，嗜热杆菌适宜生存在高温条件下，而其它微生物在高温条件不能生存，因此微生物培养过程中，若实验室保存的嗜热杆菌被大肠杆菌污染，可将菌种接种到LB细菌通用培养基上后高温培养，将嗜热杆菌筛选出来。
（2）提取嗜热杆菌基因组作为体外扩增的模板，由于每种基因扩增均需要两种引物，因此共需要加入6种不同的引物，扩增出蛋白SufB、SufC、SufD的基因，作为目的基因。
（3）为获得sufBC融合基因，应将B基因的末端和C基因的首端进行连接，即需要选择图1中的b、c端，使其带上相同的酶切位点后，利用限制酶和DNA连接酶获得sufBC融合基因。
（4）由于嗜热杆菌属于原核生物，因此为保持目的基因的表达产物生物活性基本保持不变，因此图2中受体细胞X最好选择大肠杆菌。
（5）分析图3，实验组和2、3两组实验比较，虽然实验组洗去未结合的SufD蛋白，但是电泳结果中仍然出现SufBC融合蛋白和SufD蛋白，说明SufBC融合蛋白和SufD蛋白有相互作用。