Question

【题目】植物基因工程中，往往用光诱导型启动子(PrbcS)使目的基因表达，其结合T基因后能使目的基因更高水平表达。下图中①和②都为基因表达载体构建过程中的中间载体，请分析重组载体的部分构建过程并回答下列问题：

注：Ampr/Kmr分别为氨苄青霉素/卡那霉素抗性基因。origin为复制原点，其余为限制酶切位点。

(1) 对双子叶植物进行基因工程改造最常用的方法是____________，还需结合____________技术才能获得新性状的植株。

(2) 中间载体通常用________法导入微生物中扩增，含有中间载体②PrbcS*T的微生物与含有中间载体①PrbcS*T的微生物相比，区别两者差别的方法是____________________________。

(3) 经酶切后凝胶电泳，测得2B片段为0.4kb，经图示信息分析，Prbcs*T的长度约为________。写出中间载体②Prbcs*T图中问号处限制酶的酶切位点：________________________。

(4) 如何在T基因前“点突变引入NcoⅠ”酶切位点？ ___________________。

Answer 1

【答案】农杆菌转化法 植物组织培养技术 感受态细胞法 含有中间载体②PrbcS*T的微生物能在含有卡那霉素的培养基中生长，而不能在含有氨苄青霉素的培养基中生长(或含有中间载体①PrbcS*T的微生物能在含有氨苄青霉素的培养基中生长，而不能在含有卡那霉素的培养基中生长) 1.7 kb SphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤ 设计包含NcoⅠ识别序列的引物，然后用PCR技术扩增

【解析】

基因工程中目的基因导入的受体细胞不同，选用的方法不同，一般导入双子叶植物常用农杆菌转化法，导入动物细胞常用显微注射法，导入微生物常用感受态法。运载体上常含有标记基因，可用来筛选目的基因是否导入受体细胞。

（1）将目的基因导入双子叶植物常利用农杆菌转化法。要想获得转基因植物，还需要对导入目的基因的受体细胞进行植物组织培养。

（2）将中间载体导入微生物时常先用钙离子处理微生物使其成为感受态，易于吸收中间载体，该种方法为感受态细胞法。由图可知，中间载体②上含卡那霉素抗性基因，而不含氨苄青霉素抗性基因，故含有中间载体②PrbcS*T的微生物能在含有卡那霉素的培养基中生长，而不能在含有氨苄青霉素的培养基中生长。

（3）由图可知，中间载体②的长度为2.7kb，经酶切后凝胶电泳，测得2B片段为0.4kb，设Prbcs*T的长度为y，则2.7-0.4+y=4kb，解得y=1.7kb。根据图示中中间载体①PrbcS*T右侧的酶切位点和中间载体②-2B右侧的酶切位点可知，中间载体②Prbcs*T图中问号处限制酶的酶切位点可为SphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤ的酶切位点。

（4）可设计包含NcoⅠ识别序列的引物，然后用PCR技术扩增，即可在T基因前“点突变引入NcoⅠ”酶切位点。