Question

2．大肠杆菌是一种兼性厌氧菌，在无氧条件下，发酵能将葡萄糖转换成多种有机酸并生成二氧化碳，某研究机构用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定．
回答下列相关问题：
（1）研究人员向葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水溶液后，装入图甲所示的试管中，再将污水水样滴加进去振荡均匀，适宜条件下培养一段时间后可观察到溶液颜色的变化是由蓝变绿再变黄．
（2）图乙中滤膜的孔径应大于（“大于”、“小于”或“等于”）大肠杆菌．
（3）制备图乙中牛肉膏蛋白胨固体培养基时，培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法，待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板．
（4）为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入伊红美蓝染料，该研究机构通过统计黑色菌落色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目．理论上他们的统计值要比实际值偏低，（“偏高”、“偏低”或“相等”） 理由是两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落．

Answer 1

分析 1、二氧化碳可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄．
2、消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

3、伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料，大肠杆菌在含有伊红美蓝培养基上形成的菌落呈深紫色（黑色），并有金属光泽，伊红美蓝是专一鉴别大肠杆菌的指示剂．
4、常用的纯化微生物时的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法．
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）由题干“在无氧条件下，大肠杆菌通过发酵能将葡萄糖转变为多种有机酸并产生CO₂等气体”，向葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝培养一段时间的大肠杆菌，可产生CO₂气体，CO₂可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄．
（2）分析图解可知，实验将待测水样进行过滤，得到的滤膜进行微生物培养，因此水中的大肠杆菌应留在滤膜上，即图甲中滤膜的孔径应小于大肠杆菌．
（3）培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板．
（4）伊红美蓝是专一鉴别大肠杆菌的指示剂，为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入伊红美蓝作为指示剂．在伊红美蓝培养基上，可以鉴定出菌落为黑色的具有金属光泽的大肠杆菌，因此该小组通过统计黑色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目．由于培养基中两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落，因此理论上他们的统计值比实际值偏低．
故答案为：
（1）由蓝变绿再变黄
（2）大于
（3）高压蒸汽灭菌法      50
（4）伊红美蓝     黑色菌落    偏低     两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落

点评 本题考查微生物的培养、分离和计数的知识，考生识记所列知识点，并能运用所学知识做出合理的判断或得出正确的结论是解题的关键．