Question

毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关．获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图，认真看图后回答问题．

（1）过程①中最常用的运载工具是质粒，此外，噬菌体的衍生物和

 

也可以做运载体，人工合成的KIFⅡ基因基因可通过

 

技术手段体外迅速扩增．
（2）要将重组质粒导入羊胎儿成纤维细胞的方法是

 

，重组质粒导入之后，可通过

 

技术，来检测KIFⅡ基因是否已重组到羊胎儿成纤维细胞的染色体DNA上．
（3）在过程②中，从羊的胚胎中取胎儿成纤维细胞，用

 

处理，然后进行分散培养．培养时，将培养瓶置于含

 

（要求写清楚每种气体所占比例）的混合气体培养箱中进行培养，培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，一般还应添加

 

．当贴壁的成纤维细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止生长，这种现象成为细胞的

 

．
（4）在过程③中，用

 

处理以获取更多的卵（母）细胞．卵（母）细胞应培养
到

 

期．成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行

 

处理．然后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞．再利用物理或化学方法刺激，使之完成细胞分裂和发育，在体外培养成重组早期胚胎．
（5）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是

 

．将早期胚胎通过胚胎移植技术移入代孕母羊．早期胚胎在

 

期开始出现分化．胚胎移植前可通过

 

技术可获得较多胚胎．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,动物细胞与组织培养过程,胚胎分割移植

专题：

分析：分析题图：图示表示获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程图，其中①表示基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶、DNA连接酶和运载体；②表示动物细胞培养过程，该过程需要采用胰蛋白酶处理组织块以获得单个细胞；③表示卵母细胞的采集和培养过程．

解答： 解：（1）过程①表示基因表达载体的构建过程，常用的运载工具是质粒、噬菌体的衍生物和动植物病毒，人工合成的KIFⅡ基因基因可通过 PCR技术手段体外迅速扩增．
（2）将重组质粒导入羊胎儿成纤维细胞的方法是显微注射法；重组质粒导入之后，可通过DNA分子杂交技术，来检测KIFⅡ基因是否已重组到羊胎儿成纤维细胞的染色体DNA上．
（3）过程②表示动物细胞培养，从羊的胚胎中取胎儿成纤维细胞，用胰蛋白酶和胶原蛋白酶处理形成单个细胞．培养时，将培养瓶置于含95%的空气（维持细胞代谢）和5%CO2（维持培养基（液）的pH）的混合气体培养箱中进行培养，培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，一般还应添加动物血清．当贴壁的成纤维细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止生长，这种现象成为细胞的接触抑制．
（4）过程③表示卵母细胞的采集和培养，要得到更多的卵（母）细胞需用促性腺激素对动物进行超数排卵处理，应培养到减数第二次分裂中期期；成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行去核处理，以保证克隆后代的遗传性状主要来自于供体核．
（5）从重组细胞到早期胚胎需要才用早期胚胎培养技术；早期胚胎在囊胚期开始出现分化．在胚胎移植时，可通过胚胎分割技术获得更多的胚胎．
故答案为：
（1）动植物病毒   PCR
（2）显微注射法   DNA分子杂交
（3）胰蛋白酶     95%的空气和5%CO2    动物血清   接触抑制
（4）促性腺激素     减数第二次分裂中期     去核
（5）早期胚胎培养   囊胚期    胚胎分割

点评：本题结合转基因山羊培育过程图，考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记所列知识要点，能准确判断图中各过程的名称，并能在较简单的情境中使用，属于考纲识记层次的考查．