Question

【题目】为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。

（1）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为______个和_____个。

（2）根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小。_________________

（3）BamH Ⅰ与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后_______序列明显增多。

（4）用于基因治疗的基因种类有：______________、_____________、_____________。

Answer 1

【答案】 3 2 GGATCT//CCTAGA 从健康人体上分离得到的功能正常的基因 反义基因 自杀基因（或编码可以杀死癌变细胞的蛋白酶基因）

【解析】

限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶。根据表格数据分析，已知一线性DNA序列共有2100+1400+1000+500=5000bp，其经A酶切割后形成2100bp、1400bp、1000bp、500bp共4个片段，说明酶A有3个切割位点；再经B酶切割后，2100bp被切割成了1900bp和200bp，1400bp被切割成了800bp和600bp，1000bp和500bp没有被切割，说明酶B有2个切割位点；同样的道理，线性DNA经B酶切割后形成2500bp、1300bp、1200bp共3个片段，说明酶B有2个切割位点；再经A酶切割后，2500bp被切割成了1900bp和600bp，1300bp被切割成了800bp和500bp，1200bp被切割成1000bp和200bp，说明酶A有3个切割位点。

（1）根据以上分析已知，A酶的识别序列和切割位点为3个，酶B的识别序列和切割位点为2个。

（2）根据以上分析已知，A酶切割后的片段为2100bp、1400bp、1000bp、500bp，再经过B酶后将其中的2100bp切割成了1900bp和200bp，1400bp切割成了800bp和600bp；而B酶第一步水解的产物是2500bp、1300bp、1200bp，再经过A酶后将其中的2500bp切割成了1900bp和600bp，1300bp切割成了800bp和500bp，1200bp切割成1000bp和200bp，因此两者酶的切割位点如图所示：

。

（3）据图分析，两种限制酶切割后漏出来的碱基序列都是-GATC-，可以发生碱基互补配对形成或，因此若干循环后该序列明显增多。

（4）用于基因治疗的基因种类有：从健康人体上分离得到的功能正常的基因、反义基因、自杀基因（或编码可以杀死癌变细胞的蛋白酶基因）。