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    为实现目的基因与载体结合，以便在大肠杆菌中大量表达相应的蛋白质，研究人员进行了如图所示操作。请分析回答下列问题：

    (1)将_____________同时用BamH I切割并混合，加入___________进行连接，再与大肠杆菌感受态细胞混合，最后，将混合物接种在含有___________平板培养基上。

    (2)切割后的载体用碱性磷酸酶处理，除去末端的5’磷酸，可防止载体自我连接，目的基因片段不用碱性磷酸酶处理，仍然能与用碱性磷酸酶处理过的载体连接。在5组平板培养基上接种了不同操作的大肠杆菌感受态细胞，如下表所示。

    ①第1组实验目的是确认____________是否符合实验要求。

    ②第2组平板培养基菌落数目最大，说明大肠杆菌感受态细胞能够___________

    ③第3组实验用来检验___________酶是否具有活性。第4组实验用来检验___________酶是否具有活性。

    ④实验中用碱性磷酸酶处理载体可以降低仅有载体的菌落数，增加携带___________的菌落比例

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    科目：高中生物 来源：江苏省仪征中学2010－2011学年高二上学期期末统考生物试题（选修） 题型：071

    下图（一）为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素（抗生素）抗性基因，tctR为四环素（抗生素）抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。下图（二）为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题：

    （1）在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的________酶；二是将目的基因与运载体拼接的________酶；三是作为运载体的质粒。

    （2）将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体（质粒）进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有________种，其中有效的（所需要的）重组DNA是________，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。

    （3）利用图（一）所示的质粒拼接形成的拼接产物（重组DNA）与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物（重组DNA）是________。

    （4）有效的重组DNA成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图（一）中的________。

    （5）在基因工程中，作用于图（二）所示b位置的酶是________。

    （6）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的形成是通过基因工程实现的，它是将水母绿色荧光蛋白基因转移到猪的特定细胞中，操作过程中一般利用未受精的卵细胞去核后做为受体，而不用普通的体细胞，原因是：________________。

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    科目：高中生物 来源：2013届吉林省高二下学期第一次月考生物试卷（解析版） 题型：综合题

    （14分）据调查，随着化学农药的产量和品种逐年增多，害虫的抗药性也不断增强，造成的危害很严重，如近年来，棉铃虫在我国大面积暴发成灾，造成严重经济损失。针对这种情况，经研究发现寄生在棉铃虫消化道内的苏云金芽孢杆菌能分泌一种毒蛋白，它能使寄主至死而对人畜无害。我国科技工作者已成功地将该毒蛋白基因导入棉花植株体内并实现表达。由于棉铃虫吃了这种“转基因抗虫棉”就会死亡，所以该种棉被推广后，收到了很好的经济效益。

        请据以上材料，回答下列问题：

    ⑴害虫抗药性的增强是__________________________的结果。

    ⑵抗虫棉的具体培育过程包括                          、                          、

                                 、                             。                               

    （3）该项技术的遗传学原理是                                           （    ）

    A．基因突变       B．基因重组 Ｃ．基因复制     Ｄ．基因分离

    （4）利用下面技术可获得抗虫基因。如：从苏云金芽孢杆菌核糖体上分离出            ，

    并以此为模板，        成互补的单链DNA，然后单链DNA在酶的作用下合成                 。

    （5）要使抗虫基因与质粒结合，必须用               来切割基因载体和目的基因，切割后的质粒与目的基因片段还需要              酶，根据              原则使两者粘合在一起。

    （6）抗虫棉之所以能抗虫，是因为棉花细胞中的抗虫基因表达出                              。

    （7）该科技成果在环保上的重要作用是  ___________________________________________。

     

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    科目：高中生物 来源：2013届河南省高二3月月考生物试卷 题型：综合题

    据调查，随着化学农药的产量和品种逐年增多，害虫的抗药性也不断增强，造成的危害很严重，如近年来，棉铃虫在我国大面积暴发成灾，造成严重经济损失。针对这种情况，经研究发现寄生在棉铃虫消化道内的苏云金芽孢杆菌能分泌一种毒蛋白，它能使寄主至死而对人畜无害。我国科技工作者已成功地将该毒蛋白基因导入棉花植株体内并实现表达。由于棉铃虫吃了这种“转基因抗虫棉”就会死亡，所以该种棉被推广后，收到了很好的经济效益。

        请据以上材料，回答下列问题：

    ⑴害虫抗药性的增强是__________________________的结果。

    ⑵“转基因”抗虫棉的培育应用了_______________技术。抗虫棉的具体培育过程包括

                          、                        、                       、    

                               

    （3）该项技术的遗传学原理是                                           （    ）

    A．基因突变     B．基因重组 Ｃ．基因复制   Ｄ．基因分离

    （4）利用下面技术可获得抗虫基因。如：从苏云金芽孢杆菌核糖体上分离出            ，

    并以此为模板，        成互补的单链DNA，然后单链DNA在酶的作用下合成                 。

    （5）要使抗虫基因与质粒结合，必须用               来切割基因载体和目的基因，切割后的质粒与目的基因片段还需要              酶，根据              原则使两者粘合在一起。

    （6）抗虫棉之所以能抗虫，是因为棉花细胞中的抗虫基因表达出                              。

    （7）该科技成果在环保上的重要作用是  ___________________________________________。

     

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    科目：高中生物 来源：2010年河南省郑州市高二下学期期中考试生物卷 题型：综合题

    科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株一抗虫棉。其过程大致如图所示：

     

    （1）Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为＿＿＿＿；将目的基因导人受体细胞的方法有很多种，该题中涉及的是＿＿＿＿＿＿＿＿。

    （2）目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达，关键是是否使＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿上，这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

    （3）“转基因抗虫棉” Bt毒蛋白基因表达过程可表示为＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；科学家预言，此种“转基因抗虫棉”独立种植若干代以后，也将出现不抗虫的植株，此现象来源于＿＿＿＿＿＿＿＿。

    （4）若要把Bt毒蛋白基因导入到大肠杆菌中，要先用＿＿＿＿处理细胞，使细胞处于＿＿＿＿＿＿（状态），然后将重组表达载体DNA溶于缓冲液中，在一定温度下与细胞混合。

     

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