Question

【题目】如图是利用大肠杆菌生产埃博拉病毒（EBOV）VP40蛋白的过程．请据图回答：

（1）①利用PCR技术扩增目的基因的过程中，反应体系内要加入 ， PCR的全称是 ， 第次复制的产物中才开始出现目的基因．
（2）过程②构建基因表达载体时选用EcoRI和XhoI双酶切的优点是 ， 目的基因与质粒连接形成重组DNA后含有个游离的磷酸基团．
（3）基因表达载体A的组成除了目的基因外，还必须有 ， 过程③VP40基因进入大肠杆菌细胞，并在大肠杆菌内维持稳定和表达，该过程可称为 ．
（4）检测过程④是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是 ．

Answer 1

【答案】
（1）含有VP40基因的DNA、分别与两条模板结合的引物、四种脱氧核苷酸和Taq 酶；聚合酶链式反应；3
（2）防止酶切产物之间的随意连接，提高连接成功率；0
（3）标记基因、启动子、终止子；转化
（4）抗原﹣抗体杂交
【解析】解：（1.）PCR扩增时，需要在一定的缓冲溶液中加入DNA模板、分别与两条模板结合的引物、四种脱氧核苷酸和Taq 酶．PCR的全称是聚合酶链式反应，由于引物A和引物B均不在该片段的端点，因此第一轮循环后，得到的两DNA片段中两条脱氧核苷酸链都不等长；通过绘图可推知，第二轮中亦不会出现等长的引物，所以在第三轮循环产物中开始出现两条核苷酸链等长的DNA片段．
（2.）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA连接酶只能将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来，因此为了防止目的基因反向粘连和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoRI和XhoI，提高连接成功率；目的基因与质粒连接形成重组DNA后，形成的是环状DNA，因此含有0个游离的磷酸基团．
（3.）基因表达载体A的组成除了目的基因外，还必须有标记基因、启动子、终止子；VP40基因进入大肠杆菌细胞，并在大肠杆菌内维持稳定和表达，该过程可称为转化．
（4.）检测过程④是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是抗原﹣抗体杂交．
【考点精析】本题主要考查了基因工程的原理及技术的相关知识点，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术才能正确解答此题．