Question

【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的 。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到 期时， 可从其内细胞团分离出ES细胞。

（3）步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的 设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有 酶的酶切位点。

（4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。

Answer 1

【答案】（1）细胞核 （2）囊胚 （3）核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ （4）蛋白质

【解析】本题以胚胎干细胞培养为背景，考查了核移植、动物细胞培养、基因工程相关知识。（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核。（2）内细胞团位于囊胚中，所以重组胚胎培养到囊胚期。（3）设计引物要遵循碱基互补配对原则，所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计。Rag2基因基因是用HindⅢ和PstⅠ限制酶切割获得，所以表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点。（4）基因表达的产物是蛋白质，所以提取小鼠骨髓细胞的蛋白质进行抗原－抗体杂交。