Question

【题目】基础知识检测

（1）绘制单克隆抗体的制备流程，标明重要的步骤名称。（_______）

（2）补充绘制完整第一轮PCR过程：补充各步骤名称和温度、绘制第一轮的产物；绘制第二轮PCR结束后所有产物分子（标出引物A和引物B的位置和5＇、3＇方向）。（______）

Answer 1

【答案】

【解析】试题分析：单克隆抗体的制备流程可以参考课本中图解流程进行文字化表述。PCR技术的步骤：（1）DNA变性(90℃-96℃)：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA；（2）退火(复性)(40℃-65℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链；（3）延伸(68℃-75℃)：在taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。

（1）给动物注射特定抗原→提取已免疫的B淋巴细胞

提取同种动物的骨髓瘤细胞→诱导二者融合为杂交细胞→筛选并克隆化培养既能迅速增殖，又能产生所需抗体的杂交瘤细胞→进行体外培养杂交瘤细胞或者植入动物体内培养杂交瘤细胞→提取所需的单克隆抗体。

（2）结合前面的分析可知，由于DNA的两条链是反向的，在引物结合与延伸时，二者也表现为方向是相反的。根据已知图解中两条模板链上结合的引物位置为起点，第一轮：以5′端→3′端为模板链的子链延伸方向为从右向左；以3′端→5′端为模板链的子链延伸方向则是从左向右。第二轮：以原母链的两条链为模板的引物结合部位和延伸方向与第一轮相同，以第一轮得到的含引物A的子链为模板则在另一端结合引物B从左向右延伸，而以第一轮得到的含引物B的子链为模板则在另一端结合引物A从右向左延伸（见参考答案图示）