Question

【题目】环境中大量的尿素存在会造成污染环境；土壤中有一些细菌含有脲酶，可通过降解尿素产生氨，使酚红指示剂呈现红色。某研究小组从土壤中筛选产脲酶细菌，用以回收氮源同时净化环境。

（1）在培养产脲酶菌株在内的异养微生物时，培养基营养成分应包括水和__________（用序号组合回答）。

①蔗糖 ②尿素 ③生长因子 ④葡萄糖 ⑤无机盐

图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，请据图回答：

（2）分离培养细菌时必须进行无菌操作，培养基的灭菌一般采用__________法。配制培养基时，灭菌与调节pH的先后顺序是_____________。

（3）从土壤中筛选产脲酶细菌，下列实验操作正确的______________。

A.将土壤用无菌水稀释，此过程在超净操作台上操作

B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上

C.可用加酚红指示剂选择培养基筛选分解尿素的细菌

D.可将固体培养基直立放入适宜温度的恒温箱中培养3-4天

（4）利用产脲酶细菌生产分泌性脲酶，以下符合该酶分离纯化的正确流程是____________。

②冷冻干燥 ①制成酶制剂 ③发酵液过滤 ④层析法提纯蛋白酶

Answer 1

【答案】①②③⑤/②③④⑤ 高压蒸汽灭菌 先调pH后灭菌 ABC ③④②①

【解析】

培养基的基本成分是水、无机盐、碳源和氮源；制培养基时，为防止杂菌感染，应先调PH后灭菌。

（1）在培养产脲酶菌株在内的异养微生物时，培养基营养成分应包括水、无机盐、碳源（蔗糖或葡萄糖）、生长因子，以尿素作为唯一的氮源。

（2）培养基的灭菌一般采用高压蒸汽灭菌法。配制培养基时，为防止杂菌感染，应先调PH后灭菌。

（3）从土壤中筛选产脲酶细菌，根据题图可知实验所用接种方法为稀释涂布平板法，因此正确操作是：将土壤用无菌水稀释，此过程在超净操作台上操作，A正确； B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上，B正确； C.可用加酚红指示剂选择培养基筛选分解尿素的细菌，C正确；D.可将固体培养基倒置放入适宜温度的恒温箱中培养3-4天，D错误。

（4）用产脲酶细菌生产分泌性脲酶，该酶分离纯化的正确流程是：发酵液过滤→层析法提纯蛋白酶→冷冻干燥→制成酶制剂。