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    15．为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种．

    （1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，从陆地棉和拟南芥的基因文库中获取酶D基因和转运肽基因，所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如图所示．则用ClaⅠ和DNA连接酶处理两个基因后，可得到A端与D端（填图中字母）相连的融合基因．
    （2）将上述融合基因插入如图所示Ti质粒的T-DNA中，构建基因表达载体（或“重组质粒”）并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含四环素的固体培养基上筛选培养得到含融合基因的单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的侵染液．
    （3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞．
    （4）进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株．用核酸分子杂交法在分子水平上可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功转录．

    分析 1、基因工程技术的基本步骤：
    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
    2、cDNA文库和基因文库的比较表：

    文库类型cDNA基因组文库
    文库大小小大
    基因中启动子无有
    基因中内含子无有
    基因多少某种生物的部分基因某种生物的全部基因
    物种间的基因交流可以部分基因可以

    解答 解：（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．酶D基因的A端和转运肽基因的D端都含有限制酶ClaⅠ的切割位点，因此可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因．
    （2）农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上．因此，将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体并导入农杆菌中．由图可知，标记基因是四环素抗性基因，因此将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液．
    （3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜．
    （4）检测目的基因是否成功导入受体细胞可采用DNA分子杂交技术．
    故答案为：
    （1）基因文库    ClaⅠDNA连接    A   D
    （2）基因表达载体（或“重组质粒”）    四环素
    （3）利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞     
    （4）核酸分子杂交

    点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题，能结合图中信息准确答题．

    练习册系列答案
    年级 高中课程 年级 初中课程
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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    5．2014年埃博拉病在非洲蔓延，我国派出医疗队首次在境外组建医院，帮助非洲防控埃博拉疫情．
    （1）研究表明，埃博拉病毒侵入机体后，通过靶向感染、破坏吞噬细胞等，使其不能暴露该病毒的特有抗原或抗原肽-MHC，以致感染信息不能呈递给T细胞，从而无法正常激活细胞免疫和体液免疫应答过程，导致机体对该病毒的特异性免疫功能下降．因此，病毒在体内快速增殖、致病．
    （2）对志愿者接种埃博拉试验疫苗后，机体免疫系统能产生相应抗体，还能产生的免疫细胞有记忆细胞、效应T细胞．此后当外界埃博拉病毒侵入机体，机体就会启动二次免疫，此过程的特点是：反应更快更强烈，产生的抗体量更大．
    （3）人体的免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫活性物质组成．
    （4）免疫系统的防卫功能分两类，其中非特异性免疫的特点是机体生来就有，不针对某一类特定病原体，而是对多种病原体都有一定的防御作用．
    （5）在特异性免疫中，T细胞可产生淋巴因子，受到抗原刺激的B细胞可在该因子的作用下，增殖分化为浆细胞，浆细胞产生抗体，参与体液免疫过程．

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    6．孟德尔以豌豆为实验材料获得F2的性状分离比为3：1．对于其需要满足条件的表述，错误的是（　　）
    A．控制该性状的基因位于细胞核的染色体上
    B．F1产生的雌配子和雄配子的数量相等
    C．F1的雌雄配子结合的机会均等
    D．F2的性状分离比是大量数据统计的结果

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    科目：高中生物 来源： 题型：多选题

    3．关于多倍体说法正确的是（　　）
    A．四倍体西瓜有种子
    B．三倍体西瓜无子是因为它不能正常产生精子，也不能正常产生卵细胞
    C．三倍体西瓜无子是因为它不能正常产生精子，但能正常产生卵细胞
    D．种子站售的三倍体西瓜种子是从三倍体西瓜（果肉细胞有3个染色体组）中剖出来的

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    10．如图所示，下列关于利用胚胎工程技术繁殖优质山羊的叙述，错误的是（　　）
    A．良种公山羊采集的精子在培养液中获能后才能具备受精能力
    B．人工授精后的受精卵发育到原肠胚阶段才能进行胚胎移植
    C．为了进一步扩大繁殖规模，可通过胚胎分割技术获得同卵双胎
    D．胚胎移植可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    20．我国珠江三角洲地区，为充分利用土地，创造了一种挖深鱼塘、垫高基田、塘基植桑、塘内养鱼的高效人工生态系统--桑基鱼塘，如图所示．据图回答有关问题：
    （1）生态工程遵循的基本原理有物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理和系统学与工程学原理等．
    （2）该生态工程能将蚕沙、蔗叶、滤泥等变成鱼类的饵料，塘泥中的微生物能将有机物转化成无机物，为甘蔗、桑树的光合作用提供无机营养，这一过程实现了物质和能量的多级利用．
    （3）蚕沙是蚕食桑叶后排泄出来的粪便，蚕沙富含粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维等营养物质，是上等的肥料，也是猪、鱼、羊的理想饲料．某种鱼专以蚕沙为食，假设某一时间段蚕从上一个营养级固定的能量为1.5×105kJ，那么这部分能量最多有0kJ被这种鱼所同化．
    （4）该生态系统向外输出的物质主要有蚕丝、鱼、糖等．
    （5）该生态系统与一般的自然生态系统相比较，抵抗力稳定性较低，所以需要人们不断输入物质与能量．
    （6）桑基鱼塘的生产方式与改造前的传统耕作方式比较，主要的优点有减轻水患、提高经济效益、减少环境污染等（至少答2点）．

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    7．“满城尽带黄金甲”描述的是菊花盛开时的景象，要在短时间内快速获得大量的菊花，可以采用植物组织培养的技术．请回答相关问题：
    （1）植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性．离体的植物组织培养一段时间之后会形成愈伤组织，愈伤组织细胞是一种排列疏松而无规则，高度液泡化化的呈无定型状态的薄壁细胞，由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程叫做脱分化．
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    C．糖尿病患者的内环境中葡萄糖的含量应比正常人的要高

    D．老鼠处于衰老过程中，体内细胞都出现细胞核变大、核膜内折等现象

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    2．下列有关细胞分裂的叙述，正确的是（　　）
    A．有丝分裂后期着丝粒分裂，姐妹染色单体移向两极
    B．在细胞分裂的间期，由于染色体的复制导致染色单体和DNA分子加倍，而染色体数目不变
    C．若在G2期加入DNA合成抑制剂，则有丝分裂前期每个染色体仍含有2条染色单体，子细胞染色体数目与母细胞的相同
    D．精子形成过程中，若某一对同源染色体未分开，则形成的精子有一半不正常

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