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    下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题。
    资料1　巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达[5'AOX1和3'AOX1(TT)分别是基因AOX1的启动子和终止子]。
    资料2　巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。

    (1)如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上______、______限制酶识别序列， 这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。
    (2)酶切获取HBsAg基因后，需用________将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取_______               _。
    (3)步骤3中应选用限制酶________来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。
    (4)为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用_____     ___方法进行检测。
    (5)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入____   ____以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。
    (6)与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行___       _____并分泌到细胞外，便于提取。

    (1)SnaBⅠ　AvrⅡ　(2)DNA连接酶　大量重组质粒　(3)BglⅡ　(4)DNA分子杂交　(5)甲醇　(6)加工(修饰)

    解析试题分析：（1）据图分析，由于SnaBⅠ和AvrⅡ识别的序列在启动子与终止子之间，故在目的基因两侧A和B位置分别接上这两种序列，并用两种内切酶对质粒和目的基因同时切割，便会各自出现相同的粘性末端，再用DNA连接酶连接HBsAg基因和pPIC9K质粒为重组质粒。
    （2）由于大肠杆菌繁殖速度快，容易培养，故经常作为基因表达载体的受体菌，有利基因表达载体的复制。
    （3）重组DNA的两侧分别是启动子和终止子，除BglⅡ外，其它限制酶会破坏含有启动子、终止子的目的基因，故应该选择BglⅡ来切割重组质粒获得重组DNA。
    （4）检测目的基因是否成功插入到受体细胞染色体，通常用DNA分子杂交技术。
    (5)分析资料1可知，甲醇为该酵母菌的唯一碳源，同时诱导HBsAg基因表达。
    (6)酵母菌为真核生物，具有内质网和高尔基体等细胞器，能够对蛋白质进行加工为分泌蛋白，而细菌等原核生物没有各种细胞器（除了核糖体），无形成分泌蛋白。
    考点：本题考查基因工程相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论能力。

    练习册系列答案
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    科目：高中生物 来源： 题型：综合题

    在正常情况下，动物和人体内环境是能够相对稳定的，这种稳态是细胞进行正常生命活动所不可缺少的。回答下列问题。
    (1)血浆的pH之所以能保持相对稳定是因为其中含有________。肺气肿患者由于呼吸不畅，血液的pH将略有________，这是因为_________________________________________。
    (2)若某人长期营养不良，血浆中蛋白质降低，会引起内环境中哪一部分的液体增多？________，其结果将会引起组织________。
    (3)对人体来说，体温恒定也是内环境稳态的一项重要内容，这对于细胞的生命活动来说必不可少，这是因为________________________。

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    科目：高中生物 来源： 题型：综合题

    为了探究外界因素与蜜柑光合作用速率之间的关系，实验人员在4月、6月测定了某地晴朗天气条件下蜜柑叶片的净光合速率(A图)和胞间C02浓度(B图)的变化情况。请据图回答下列问题：

    (1)与蜜柑叶肉细胞净光合作用速率大小直接相关的细胞结构是   。
    (2)影响蜜柑叶片胞间C02浓度大小的因素较为复杂，一方面与叶片气孔的   有关，另一方面也与   有关。
    (3)在4月晴天的ll：00～13：00时，蜜柑叶片净光合速率下降，据图分析，此时蜜柑叶片净光合作用速率下降的直接原因是   ，进而导致光合作用的   (填反应阶段和生理过程的名称)受阻，从而影响光合作用速率。
    (4)在6月晴天的ll：00～13：00时，蜜柑叶片的胞间C02浓度明显上升，但净光合速率却显著降低，最可能的原因是   。进一步研究发现，此时叶绿体中的ATP的相对含量显著降低，一方面可能是   影响有关酶的活性，另一方面可能是高温、强光导致叶肉细胞叶绿体中的     (填结构名称)受损，进而影响了净光合作用速率。此时，采用向叶片喷雾的方法，则可有效提高蜜柑的净光合作用速率。

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    科目：高中生物 来源： 题型：综合题

    蓝莓是世界粮农组织推荐的五大健康水果之一，人工育的蓝莓植株株高可达240cm。科研人员为了探究生长素类似物吲哚丁酸(IBA)的不同使用方法和使用浓度对蓝莓组培苗瓶内生根的影响，开展了实验研究。具体方法如下：
    ①选用生长良好、生理状态相似的蓝莓苗，剪切成2．5cm单苗段备用。
    ②采用不同的处理方法，对制备好的单苗段进行处理。方法l是将IBA预先添加到基本培养基中，形成含不同IBA浓度的培养基，再将单苗段接种到相应培养基上。方法II是将单苗段置于不同浓度的IBA溶液中沾蘸5秒，再接种到基本培养基中。
    ③测定l2、18和30天的生根率，获得的数据如下表。

    请分析并回答：
    (1)在本实验中，对照组的组别为   。
    (2)在基本培养基中添加IBA并调节浓度为0．5 mg／L时，对诱导蓝莓生根起 作用，若需进一步确定在培养基中添加IBA的最适浓度，则需要在IBA浓度为      范围内，设置更小的浓度梯度进行进一步的实验研究。
    (3)使用 IBA诱导蓝莓插条生根时，采用方法   (选填序号“I”、“II”)更好，原因是使用该处理方法时，在   、     等方面都具有明显的优势。
    (4)请依据实验数据，在答题卷指定位置，分别绘制出当IBA浓度为最适时，采用不同使用方法诱导蓝莓生根率随时间变化的柱形图   。

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    科目：高中生物 来源： 题型：综合题

    生态学家对某弃耕农田多年后形成的荒地进行调查。下表是此生态系统三个营养级的能量分析表。回答下列问题：
    (单位：J／hm2·a)

    营养级
    		同化量
    		未被利用量
    		分解者分解量
    		呼吸释放量
    A
    		2.48×1011
    		2.00×109
    		1.20×1010
    		3.60×1010
    B
    		2.40×107
    		6.00×105
    		4.00×105
    		2.30×107
    C
    		7.50×108
    		2.40×107
    		6.00×106
    		7.16×108
    （1）输入该生态系统生物群落的总能量是由表中     所固定的。
    （2）该生态系统第二营养级到第三营养级的能量传递效率为            。
    （3）该弃耕农田上进行的演替类型为            。
    （4）生态学家为了监测和预报该生态系统鼠害的发生情况，对弃耕后田鼠种群数量的变化规律进行了研究。调查统计发现田鼠繁殖能力很强，在最初的一个月内，种群数量每天增加1.47％。
    I．研究者通常采用            法估算该地区田鼠的种群数量。
    Ⅱ．根据             ，构建了田鼠种群增长模型为Nt =N0·λt，由此可知田鼠在最初的一个月内的生存环境条件是               。
    Ⅲ．重复观察统计田鼠数量，对所建立的模型进行        ，以利于鼠害的防治。

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    科目：高中生物 来源： 题型：综合题

    下图是以新鲜葡萄为原料利用发酵瓶制作果酒和果醋的过程简图，请分析并回答：


    （1）过程甲若为自然发酵，起主要作用的是附着在葡萄皮上的__________。在葡萄汁装入发酵瓶时，要留有大约    的空间。经过10～12天后，在酸性条件下用重铬酸钾检测样液，如果颜色变为          色，说明产生了酒精。
    （2）过程乙中使用的微生物是__________，可以从食醋中分离纯化获得，步骤如下：
    第一步：配制       （固体/液体）培养基。
    第二步：对培养基一般使用       （方法）灭菌。
    第三步：接种。微生物常用的接种方法有稀释涂布平板法和___________________。
    第四步：培养。
    第五步：挑选符合要求的         。
    （3）用上图发酵装置进行甲、乙过程时温度设置和充气口处理有何不同？
    ______________________________________。

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    科目：高中生物 来源： 题型：综合题

    近年来糖尿病患病几率明显增加，人类糖尿病的发病机理十分复杂，下图1是Ⅰ型、Ⅱ型两种糖尿病部分发病机理示意图；糖皮质激素对调节血糖也有重要作用，它由肾上腺皮质分泌，其调节作用的机理如图2所示。请分析回答：
    （1）图1中①表示的物质是_____。正常情况下，当血糖浓度升高时，结构②活动加强，据图分析，影响②发挥作用的主要物质和结构有ATP、____         。

    （2）由图2可知，糖皮质激素进入细胞后需要与_____结合，才能进一步启动基因表达过程。这些特异基因表达后，一方面使分泌抗体的_____细胞的生成受抑制，从而抑制       免疫的功能；另一方面会导致_____升高。
    （3）研究发现某抗原的结构酷似胰岛B细胞膜的某结构，则因该抗原刺激机体后产生的特异性抗体攻击胰岛B细胞而导致的糖尿病属_____（填Ⅰ型或Ⅱ型）糖尿病；从免疫学角度分析该疾病属于_____病。在临床中_____（填Ⅰ型或Ⅱ型）糖尿病不能通过注射胰岛素治疗。
    （4）如果将正常胰岛B细胞分别接种于含有5.6 mmol/L葡萄糖(低糖组)和16.7 mmol/L葡萄糖(高糖组)的培养液中，培养一段时间后进行检测，高糖组释放胰岛素多。此结果说明_____。

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    科目：高中生物 来源： 题型：综合题

    工业上可以用微生物的发酵来获得β­-胡萝卜素。回答有关胡萝卜素提取的问题：
    （1）培养基中的营养物质主要有_____。为了使发酵菌种迅速繁殖，应用_____培养基。发酵过程中应采用_____技术来防止外来杂菌的入侵，保证发酵正常进行。
    （2）在胡萝卜素的提取过程中，石油醚是理想的萃取剂，因为它具有：         、________、______等优点。萃取过程采用水浴加热，不用明火加热的原因是________。
    （3）若用胡萝卜的根尖细胞组织培养，则培养成的植株叶片的颜色为________，说明根尖细胞________。

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    科目：高中生物 来源： 题型：综合题

    肺细胞中的let?7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let?7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

    图1

    图2
    请回答有关问题。
    (1)进行过程①时，需用________酶切开载体以插入let?7基因。
    (2)进行过程②时，需用______酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
    (3)研究发现，let?7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取______进行分子杂交，以直接检测let?7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中______(RAS  mRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。

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