Question

【题目】病毒介导基因转移是现在基因治疗研究的最新方向，美、法等国成功采用腺病毒载体进行心、脑、肺、肝内胆管和肌肉组织的体内基因转移．其具体思路如图所示：

回答下列问题：
（1）如果要在短时间内获得较多的目的基因，通常采用技术，在操作步骤中包括两次升温和一次降温，其中降温的目的是 ．
（2）构建基因表达载体时需要用到的工具酶有 ．
（3）作为接受转移基因的体细胞应具有的特点是（写出一点即可）．在进行细胞培养时，当细胞贴满瓶壁时需用酶处理，使之分散成单个细胞，培养液中还需通人无菌气体，其中通入CO2的目的主要是 ．
（4）如果检测发现目的基因被成功导入了受体细胞，但却没有检测到目的基因相对应的蛋白质，应考虑位于目的基因首端的和末端的是否设计好，并从这方面进一步改善．

Answer 1

【答案】
（1）PCR；使引物和模板链结合
（2）限制酶和DNA连接酶
（3）具有增殖优势（生命周期长，能存活几月至几年，最后可延续至病人的整个生命期；必须比较坚固，足以耐受处理）；胰蛋白；维持培养液的PH
（4）启动子；终止子
【解析】解：（1）如果要在短时间内获得较多的目的基因，通常采用PCR技术，第一次升温是使双链解开，即高温解链；降温的目的是使引物和模板链结合，即低温复性；第二次升温是使DNA复制开始进行．（2）构建基因表达载体时需要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶．（3）作为接受转移基因的体细胞应具有的特点是 具有增殖优势；生命周期长，能存活几月至几年，最后可延续至病人的整个生命期；必须比较坚固，足以耐受处理等．在进行细胞培养时，当细胞贴满瓶壁时需用胰蛋白酶处理，使之分散成单个细胞，培养液中还需通人无菌气体，其中通入CO2的目的主要是维持培养液的PH．（4）基因表达载体包括启动子、终止子、目的基因和标记基因，启动子位于目的基因的首端，启动基因的转录，终止子位于目的基因的末端，终止转录过程．
所以答案是：（1）PCR 使引物和模板链结合（2）限制酶和DNA连接酶（3）具有增殖优势（生命周期长，能存活几月至几年，最后可延续至病人的整个生命期；必须比较坚固，足以耐受处理） 胰蛋白 维持培养液的PH（4）启动子 终止子
【考点精析】解答此题的关键在于理解基因工程的原理及技术的相关知识，掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术．