Question

【题目】GDNF是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：

(1)构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的_________限制酶进行酶切。

(2)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有3种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaⅠ酶和BamHⅠ酶对筛选得到的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第________泳道显示所鉴定的载体是反向连接的。

(3)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可以使用相应的____________与提取的蛋白质杂交。当细胞培养的神经干细胞达到一定密度时产生接触抑制，换瓶后进行___________培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。 (4)胚胎干细胞在培养时可以只分裂不分化，但是通过诱导可以分化成各种不同的组织细胞，胚胎干细胞的这个特性称为______________。 (5)科学家使用转基因动物生产药物时通常将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因启动子等调控组件重组在一起导入哺乳动物的受精卵中，使转基因动物通过分泌的乳汁来生产药物，此转基因动物被称作_____________。

Answer 1

【答案】 XhoⅠ ③ 抗体 传代 发育的全能性 乳腺生物反应器

【解析】试题分析：为了让限制酶切出的目的基因和载体切口能发生碱基互补配对而连接起来，通常应选择相同的限制酶对二者进行切割，所以分析图1可知，在构建含GCDNF基因的表达载体时，需选择图1中的XhoⅠ限制酶进行酶切。分析图2中电泳图谱可知，为单个载体自连，因为其DNA长度为6000kb；由于GDNF基因中有BamⅡ酶识别序列，所以图中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的；由于载体中有HpaⅠ酶识别序列，所以图中第③泳道显示所鉴定的载体是反向连接的。

（1）根据题意和图示分析可知：由于GDNF基因两边都有XhoⅠ限制酶识别序列，所以构建含GCDNF基因的表达载体时，需选择图1中的XhoⅠ限制酶进行酶切。

（2）根据前面的分析可知，如图2所示，由于载体中有HpaⅠ酶识别序列，所以图中第③泳道显示所鉴定的载体是反向连接的。

（3）为了检测GDNF基因是否成功表达，可利用抗原-抗体杂交技术，用相应的抗体与提取的蛋白质杂交，当培养的神经干细胞达到一定密度时，需进行传代培养以得到更多数量的细胞，用于细胞干细胞移植治疗实验。

（4）胚胎干细胞来源于原始性腺和早期胚胎，在培养时可以只分裂不分化，但是通过诱导可以分化成各种不同的组织细胞，说明细胞具有发育的全能性。

（5）科学家用转基因动物通过分泌的乳汁来生产药物，此转基因动物被称作乳腺生物反应器。