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    16．如表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割为点相同的酶不重复标注．请回答下列问题：

    限制酶BamHⅠBdⅠSau3AⅠGindⅢ
    识别序列及切割位点
    （1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用BclI和HindⅢ两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒．为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌．若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段．
    （2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙．
    （3）若BamHⅠ酶切的DNA末端与BelⅠ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为对于该部位，这两种酶都不能（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开．

    分析 基因工程技术的基本步骤：
    1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    4、目的基因的检测与鉴定：
    （1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
    （2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

    解答 解：（1）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割．酶切后的载体和目的基因片段，通过连接酶作用后获得重组质粒．为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌．根据BamHⅠ、BclI和Sau3A I的酶切位点，Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段
    （2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素．PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙．
    （3）根据BamHⅠ和BclI的酶切位点，若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，则连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，由于与两种酶的酶切位点均不同，故这两种酶都不能切开．
    （4）根据BamHⅠ、BclI和Sau3A I的酶切位点，Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段．
    故答案为：
    （1）BclI和HindⅢDNA连接   感受   7
    （2）四环素 引物甲和引物丙
    （3）    都不能

    点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲应用和理解层次的考查．

    练习册系列答案
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    B．此男性皮肤生发层细胞分裂时不能出现四分体
    C．该夫妇所生儿子的色盲基因一定来自于女方
    D．该夫妇再生一个表现型正常且为男孩的概率是$\frac{3}{8}$

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    实验亲本    		F1F2
    雌雄雌雄
    红眼（♀）×朱砂眼（♂）全红眼全红眼红眼：朱砂眼=1：1
    ①红眼对朱砂眼为显性，B、b基因位于X染色体上．
    ②F2代中红眼果蝇的基因型有XBXB、XBXb．
    ③让F2代红眼雌蝇与朱砂眼雄蝇随机交配，所得F3代中，雌蝇有2种基因型，雌蝇中纯合子所占比例为$\frac{1}{4}$．

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     B 提供目的基因的生物 DNA连接酶 限制酶 质粒 大肠杆菌等
     C 提供目的基因的生物 限制酶 DNA连接酶 质粒 大肠杆菌等
     D 大肠杆菌 DNA连接酶 限制酶 提供目的基因的生物 质粒
    A．AB．BC．CD．D

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