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    【题目】某种荧光蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L1）基因连接在GFP基因的首端，获得了L1-GFP融合基因（简称为甲），并将其插入质粒P0，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。

    回答下列问题：

    （1）据图推断，该团队在将甲插入质粒P0时，使用了两种限制酶，这两种酶是_________；使用这两种酶进行酶切是为了保证_____________和______________。

    （2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了________和_________过程。

    （3）为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的_____________移入牛的去核的卵母细胞中、体外培养、胚胎移植等。

    （4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的____________（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。

    【答案】E1和E4甲的完整甲与载体的正确连接转录翻译细胞核核DNA

    【解析】

    根据题干信息和图形分析，图示为重组质粒（基因表达载体P1），其结构中含有启动子、终止子、标记基因（GFP基因）和目的基因（L1基因）；图中显示甲（了L1-GFP融合基因）两侧的限制酶分别是E1、E4，因此将甲插入质粒P0需要用这两种酶处理目的基因和质粒。

    （1）根据以上分析已知，为了保证甲的完整性，将甲插入质粒P0时应该使用的两种限制酶是E1和E4，这两种限制酶切割后漏出的末端是不相同的，这样可以防止任意连接，以保证甲与载体的正确连接。

    （2）若能观察到绿色荧光，说明标记基因已经成功表达出了荧光蛋白，进而证明了目的基因已经表达，而基因的表达包括转录和翻译两个过程。

    （3）为获得转基因的动物，需要将能够产生绿色荧光细胞的细胞核取出，注入到该牛的去除细胞核的卵母细胞中，然后再进行体外培养。

    （4）进行PCR技术时，需要以DNA为模板，脱氧核苷酸为原料，同时需要加入引物，所以在检测甲是否存在于牛的不同组织细胞采用PCR技术鉴定时，要以核DNA为模板。

    练习册系列答案
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    基因

    控制合成的抗原类型

    IA

    A抗原

    IB

    B抗原

    i

    无

    (1)基因IA和基因IB的显隐性关系表现为______________。

    (2)控制ABO血型的基因型共有_________种，人群中A型血个体的基因型是___________。

    (3)—对AB型血的夫妇生了一个O型血的儿子，这对夫妇的基因型为___________。

    ①若该夫妇色觉均正常，儿子患红绿色盲，则该夫妇再生一个儿子，该儿子为A型血且色觉正常的概率为________。

    ②若该夫妇中的男性与某基因型为hhii的女性再婚，请用遗传图解预测他们子代的血型情况。_________

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