Question

【题目】科研人员将荧光素酶基因整合到慢病毒载体，利用载体将荧光素基因导入人淋巴瘤细胞。操作过程中含有以下几个过程：

(1)利用FCR技术扩增荧光素酶基因片段，首先需要设计两种引物，序列分别为(5’－GAACA………AAAAC－3’)和(5’－GAAGT………TCCCC－3’)两种引物的碱基序列分别与___________互补，且引物必须具有一定长度(如15-30个左右碱基)，以确保___________。

(2)切割慢病毒载体DNA，用___________酶将其与荧光素酶基因连接，构建出荧光素酶慢病毒重组载体。用重组载体去感染人淋巴瘤细胞，最终获得能稳定表达荧光素脂的淋巴瘤细胞。对获得的淋巴瘤细胞进行培养，培养温度应为___________，需要的气体主要有O2和CO2，其中CO2的作用是______________________。

(3)通过统计细胞数量，比较含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞(甲)和不含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞(乙)的生长情况，结果如图(a)，据图可看出这两种细胞生长趋势基本相似，说明___________；再分别取第5、6、7、8、9、10代的含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞，加入荧光素酶底物，检测荧光强度，结果如图(b)，说明_______________。

(4)将含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞注入裸鼠(无胸腺)体内，通过检测___________，可反映出小鼠体内肿瘤细胞的数量、大小和转移情况。

Answer 1

【答案】与目的基因两条链的特定片段 引物会特异性识别目的基因的特定片段（引物的特异性） DNA连接 37℃ 维持培养液的PH 荧光素酶基因的表达不影响淋巴瘤细胞生长 荧光素酶基因能在细胞生长分裂过程中稳定表达 荧光强度

【解析】

基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）利用PCR技术扩增荧光酶基因片段，首先需要设计两种引物，序列分别为（5，-CAACA……AAAAC-3，）和（5，-CAAGT……TCCCC-3，）。两种引物的碱基序列分别与目的基因两条链的特定片段互补，为确保引物会特异性识别目的基因的特定片段（引物的特异性），设计的引物必须具有一定长度（如15~30个左右碱基）。

（2）用限制性核酸内切酶切割慢病毒载体DNA，用DNA连接酶将其与荧光素酶基因连接，构建出荧光素酶慢病毒重组载体。细胞培养的所需的温度为37℃，需要的气体主要有O2和CO2，利用CO2来维持培养液的PH。

（3）据图（a）可以看出，含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（甲）和不含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（乙）的生长趋势基本相似，说明荧光素酶基因的表达不影响淋巴瘤细胞生长；据图（b）可以看出，在细胞生长分裂过程中，荧光素酶基因产生的荧光素酶与荧光素酶底物，荧光强度保持不变，说明荧光素酶基因能在细胞生长分裂过程中稳定表达。

（4）将含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞注入裸鼠（无胸腺）体内，通过检测荧光强度，可反映出小鼠体内肿瘤细胞的数量、大小和转移情况。