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14.请分析回答有关“土壤中分解尿素细菌的筛选与计数实验”的问题.
尿素是一种重要的农业氮肥,但若不经细菌的分解,就不能更好地被植物利用.生活在土壤中的微生物种类和数量繁多,同学们试图筛选出能高效降解尿素的细菌.设计了“土壤中分解尿素细菌的筛选与计数实验”,过程如图所示:

(1)为达到实验目的,本实验所配置的培养基成分应包括:1、2、4、5、9.(填入编号)
①水②无机盐(不含氮)  ③NH4NO3④尿素  ⑤葡萄糖  ⑥牛肉膏⑦蛋白胨  ⑧伊红美蓝   ⑨琼脂
(2)为能够进行菌落计数,本实验应采用的接种方法是涂布法,接种工具是无菌玻璃刮铲.
(3)在接种前,进行①~⑤系列操作的意图是使菌液逐渐按梯度稀释.根据题意,为使菌液稀释10倍,每次应加入的无菌水量是9ml.
(4)甲同学设计了“计算→称量→溶解→灭菌→倒平板→接种土壤样本→菌落计数”的实验步骤,该同学忘记了在灭菌(步骤名称)之前还需要调PH值(遗忘的步骤名称).
(5)乙同学分别接种了3个培养皿,一段时间后三个培养皿中分别长出了54个、46个、50个菌落,根据甲的实验结果,该1g土壤样本中约有分解尿素的细菌5×107个.

分析 1、培养基配置的基本过程:计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板五个步骤.
2、微生物常见的接种的方法:
①平板划线法:将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板,接种,划线,在恒温箱里培养.在线的开始部分,微生物往往连在一起生长,随着线的延伸,菌数逐渐减少,最后可能形成单个菌落.
②稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后,均匀涂布在培养皿表面,经培养后可形成单个菌落.

解答 解:(1)微生物培养基的成分主要包括碳源、氮源、水、无机盐,碳源选择⑤葡萄糖;要筛选能够分解尿素细菌,需要加入④尿素作为唯一氮源;对细菌进行计数时需要利用稀释涂布平板法,因此需要在培养基中加入⑨琼脂作为凝固剂;另外①水和②无机盐(不含氮)是培养基必需的.  
(2)为能够进行菌落计数,本实验应采用稀释涂布平板法,接种工具为无菌玻璃刮铲.
(3)在接种前,进行①~⑤系列操作的意图是使菌液逐渐按梯度稀释.根据题意,为使菌液稀释10倍,菌液取1ml,则每次应加入的无菌水量是9ml.
(4)培养基配置的基本过程:计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板五个步骤,甲同学设计的实验步骤,该同学忘记了在灭菌之前还需要调PH值.
(5)根据图解可知,对菌液进行稀释时共稀释了106倍,乙同学分别接种了3个培养皿,一段时间后三个培养皿中分别长出了54个、46个、50个菌落,根据甲的实验结果,该1g土壤样本中约有分解尿素的细菌=(54+46+50)÷3×106=5×107个.
故答案为:
(1)1、2、4、5、9     
(2)涂布法   无菌玻璃刮铲
(3)使菌液逐渐按梯度稀释    横线上均为9
(4)灭菌  调PH值          
(5)5×107

点评 本题考查了土壤中分解尿素细菌的筛选与计数实验的有关知识,要求考生能够识记培养基的成分,明确尿素分解菌筛选时需要利用尿素作为唯一氮源,掌握稀释涂布平板法中样本中细菌数目的计算方法.

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