Question

10．如图是利用大肠杆菌生产埃博拉病毒（EBOV）VP40蛋白的过程．请据图回答：

（1）①利用PCR技术扩增目的基因的过程中，反应体系内要加入含有VP40基因的DNA、分别与两条模板结合的引物、四种脱氧核苷酸和Taq酶，PCR的全称是聚合酶链式反应，第3次复制的产物中才开始出现目的基因．
（2）过程②构建基因表达载体时选用EcoRI和XhoI双酶切的优点是防止酶切产物之间的随意连接，提高连接成功率，目的基因与质粒连接形成重组DNA后含有0个游离的磷酸基团．
（3）基因表达载体A的组成除了目的基因外，还必须有标记基因、启动子、终止子，过程③VP40基因进入大肠杆菌细胞，并在大肠杆菌内维持稳定和表达，该过程可称为转化．
（4）检测过程④是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是抗原-抗体杂交．

Answer 1

分析 1、图示过程中，①为获取目的基因，②为形成重组质粒，③为目的基因的导入，④为获取相应的蛋白质．
2、PCR技术的过程：高温变性、低温复性、中温延伸．条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）．

解答 解：（1）PCR扩增时，需要在一定的缓冲溶液中加入DNA模板、分别与两条模板结合的引物、四种脱氧核苷酸和Taq 酶．PCR的全称是聚合酶链式反应，由于引物A和引物B均不在该片段的端点，因此第一轮循环后，得到的两DNA片段中两条脱氧核苷酸链都不等长；通过绘图可推知，第二轮中亦不会出现等长的引物，所以在第三轮循环产物中开始出现两条核苷酸链等长的DNA片段．
（2）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA连接酶只能将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来，因此为了防止目的基因反向粘连和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoRI和XhoI，提高连接成功率；目的基因与质粒连接形成重组DNA后，形成的是环状DNA，因此含有0个游离的磷酸基团．
（3）基因表达载体A的组成除了目的基因外，还必须有标记基因、启动子、终止子；VP40基因进入大肠杆菌细胞，并在大肠杆菌内维持稳定和表达，该过程可称为转化．
（4）检测过程④是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是抗原-抗体杂交．
故答案为：
（1）含有VP40基因的DNA、分别与两条模板结合的引物、四种脱氧核苷酸和Taq 酶     聚合酶链式反应     3
（2）防止酶切产物之间的随意连接，提高连接成功率     0
（3）标记基因、启动子、终止子    转化
（4）抗原-抗体杂交

点评 本题难度不大，综合性较强，考查了基因工程、PCR等知识，要求考生具有扎实的基础知识，并构建一定的知识网络．