Question

【题目】回答下列（一）、（二）小题。

（一）回答下列有关发酵食品生产工艺的问题：

（1）豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。影响豆豉风味的主要因素，除了菌种类型、发酵温度、pH、氧气等环境因素，还有________（答2个因素）。

（2）目前的豆豉发酵基本是一次性的，每次都经过“培养基灭菌→___→发酵→提取”，周而复始。能否________发酵、生产、提取是今后的发展方向。

（3）根据所学知识判断，下面哪种微生物更适合用豆芽汁培养基培养_________

A醋杆菌B酵母菌C乳酸菌D农杆菌

（4）在果醋发酵工艺中，用谷壳糠等将醋杆菌固定化，装在发酵瓶，下端直角玻璃管中塞____________用以过滤空气；物料瓶内装___________________，铝箔封口。发酵过程若流速过快，则可能导致____________，为保障品质，需对发酵瓶流出液________________。

（二）为开发利用沿海滩涂盐碱地，我国科学家应用基因工程培育出了耐盐碱水稻新品系，大大提高了水稻等农作物的种植面积，增加了粮食产量。据此请回答下列问题：

（1）欲将耐盐碱基因和Ti质粒进行重组形成重组质粒需要的工具酶有限制性核酸内切酶和____________，限制酶一般需要________种，这样设计的目的是____________。

（2）将重组Ti质粒构建完成后导入农杆菌，经筛选后，对含目的基因的农杆菌进行大量繁殖，其目的是____________。

（3）取田间水稻的幼胚经消毒后接种到____________（固体、半固体、液体）培养基上诱导产生愈伤组织，利用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织后，将其接种到MS生根培养基上，在该培养基中细胞分裂素具有解除高浓度生长素____________的作用。

（4）经组培获得水稻试管苗后，提取其叶片组织中的DNA，采用PCR技术扩增目的基因，目的是为了____________。要检测到转基因水稻中目的基因的表达产物，一般采用的方法是_________。

Answer 1

【答案】大豆品种（原料）、发酵时间 接种 连续地 B 脱脂棉球 酒水混合物 发酵不充分 定期检测/监控（答到一个词给分） DNA连接酶 2 防止质粒和目的基因自身环化以及定向连接 获取大量重组质粒（让目的基因扩增 或克隆目的基因 ） 半固体 抑制根生长 检测目的基因是否成功导入 抗原-抗体反应

【解析】

1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。果酒制作的原理：

（1）在有氧条件下，反应式如下：C6H12O6+6H2O+6O26CO2+12H2O+能量；

（2）在无氧条件下，反应式如下：C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量。

2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：

当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。

当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。

3、基因工程的操作步骤：一是获取目的基因；二是构建基因表达载体（核心）；三是将目的基因导入受体细胞（导入植物细胞一般有农杆菌转化法、基因枪法、花粉管道法等）；四是检测和鉴定目的基因（一是检测目的基因是否导入成功，二是检测目的基因是否成功表达，三是检测目的基因控制的性状是否在能在植株上表现出来）。

（一）（1）影响豆豉风味的因素很多，包括菌种类型、发酵温度、pH、氧气等环境因素还有发酵的大豆品种原料和发酵时间。

（2）发酵过程利用了微生物的代谢，因此培养过程要经过“培养基灭菌→接种→发酵→提取”。这种发酵技术基本上是一次性的，因此如何连续性低发酵、生产、提取是今后的发展方向。

（3）豆芽汁培养基适合培养真菌，选项中只有酵母菌属于真菌，故选B。

（4）醋酸菌是好氧细菌，下端直角玻璃管中塞脱脂棉球用以过滤空气。物料瓶内装酒水混合物，铝箔封口。发酵过程若流速过快，则可能导致发酵不充分，为保障品质，需对发酵瓶流出液进行定期检测。

（二）（1）重组质粒构建过程中，用的工具酶包括限制性核酸内切酶和DNA连接酶，其中限制性核酸内切酶一般用两种，这样防止目的基因和质粒发生自身环化以及定向连接。

（2）为了获取大量重组质粒，可对含目的基因的农杆菌进行大量繁殖。

（3）愈伤组织的培养采用的是半固体培养基。生长素具有两重性，低浓度促进生长，高浓度抑制生长，在MS生根培养基上，细胞分裂素具有解除高浓度生长素抑制生根的作用。

（4）提取叶片组织的DNA，采用PCR技术扩增目的基因，鉴定目的基因是否成功导入。对于检测转基因水稻中目的基因是否表达，可采用抗原-抗体杂交方法。