基因工程技术包括一系列的分子生物学操作步骤．请回答下列问题:(1)基因工程操作的核心步骤是构建基因表达载体．(2)限制酶.DNA连接酶和运载体是基因工程的基本操作工具．其中限制酶的特点是能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列.在特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开．(3)Mullis教授因发明PCR技术获1993年诺贝� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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10．基因工程技术包括一系列的分子生物学操作步骤．请回答下列问题：
（1）基因工程操作的核心步骤是构建基因表达载体．
（2）限制酶、DNA连接酶和运载体是基因工程的基本操作工具．其中限制酶的特点是能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，在特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（或在特定的部位断开）．
（3）Mullis教授因发明PCR技术获1993年诺贝尔奖，PCR技术中需要的酶是热稳定DNA聚合酶（Taq酶），若PCR进行20轮循环，理论上可获得2²⁰个基因片段．
（4）将目的基因导入动物受体细胞的方法是显微注射法．
（5）周光宇教授提出的花粉管通道法为我国的转基因抗虫棉作出重要贡献，请写出分子水平检测抗虫基因是否表达的方法抗原-抗体杂交技术．

分析 1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键．
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答解：（1）基因工程操作的核心步骤是构建基因表达载体．
（2）限制酶、DNA连接酶和运载体是基因工程的基本操作工具．限制酶的特点是能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
（3）PCR技术中需要的酶是热稳定DNA聚合酶；PCR的原理是DNA分子复制，若PCR进行20轮循环，理论上可获得2²⁰个基因片段．
（4）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．
（5）分子水平检测抗虫棉基因是否表达的方法为抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）构建基因表达载体
（2）运载体能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，在特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（或在特定的部位断开）
（3）热稳定DNA聚合酶（Taq酶） 2²⁰
（4）显微注射法
（5）抗原-抗体杂交技术

点评本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．

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