Question

【题目】下图是转基因抗盐马铃薯的培育过程，请据图回答：

（1）为获取抗盐基因，可以从碱蓬细胞研磨液中提取抗盐基因的___________来合成cDNA。利用PCR技术可在体外获得大量抗盐基因，该技术需要有一段已知抗盐基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成_____；扩增过程需要加入_______________酶。

（2）构建基因表达载体时，为了防止含目的基因的外源DNA片段和质粒自身环化，最好选用图中限制酶_________对它们进行切割。构建重组质粒时，还要在抗盐基因前面加上________，它是RNA聚合酶识别和结合部位，有了它才能驱动基因转录。

（3）构建基因表达载体时，应将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的________上。为了促进农杆菌吸收基因表达载体，可用____________处理农杆菌，使其处于感受态。

（4）若要从个体水平上检验转基因抗盐马铃薯是否培育成功，采用的方法是__________________。

Answer 1

【答案】 mRNA 引物 耐高温的DNA聚合酶（或Taq酶） EcoRⅠ和HindⅢ （特殊的）启动子 T—DNA Ca2+（或CaCl2） 将转基因马铃薯幼苗栽种在盐碱地中，观察能否正常生长

【解析】试题分析：本题以图文结合的形式考查学生对基因工程的基本操作程序的识记和理解能力。解答此题的关键是熟记并理解相关的基础知识、形成清晰的知识网络。在此基础上，依据图示中限制酶切割位点的位置等文字信息并结合题意作答。

(1) 碱蓬细胞研磨液中含有抗盐基因转录的mRNA，因此为获取抗盐基因，可以从碱蓬细胞研磨液中提取抗盐基因的mRNA来合成cDNA。利用PCR技术扩增抗盐基因，需要有一段已知抗盐基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物；扩增过程需要加入耐高温的DNA聚合酶（或Taq酶）。

(2) 图示显示：SmaⅠ的酶切位点在抗盐基因（目的基因）和质粒上的M抗生素抗性基因（标记基因）内，若用SmaⅠ酶切含有抗盐基因的DNA分子和质粒，则会破坏抗盐基因和M抗生素抗性基因；而EcoRⅠ和HindⅢ位于目的基因的两侧，质粒上也有EcoRⅠ和HindⅢ的酶切位点，所以用EcoRⅠ和HindⅢ两种限制酶同时酶切质粒和含抗盐基因的DNA，可防止含目的基因的外源DNA片段和质粒自身环化。启动子是RNA聚合酶识别和结合部位，有了它才能驱动基因转录。

(3)农杆菌的Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上，据此在构建基因表达载体时，应将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的T—DNA上。为了促进农杆菌吸收基因表达载体，可用Ca2+（或CaCl2）处理农杆菌，使其处于感受态。

(4)若要从个体水平上检验转基因抗盐马铃薯是否培育成功，需将转基因马铃薯幼苗栽种在盐碱地中，观察能否正常生长。