Question

16．下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题．
（1）制备稀释倍数为10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶的系列稀释液．
（2）为了得到更加准确的结果，选用适宜的方法接种样品：右图是利用平板划线法 法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上应注意第二次及以后的每次划线前要灼烧接种环，冷却后从上一区划线末端开始化，首尾区的划线不能相接．
（3）适宜温度下培养．结果分析：
①一同学在稀释倍数为10⁵的培养基中测得平板上菌落数的平均值为32.4个，那么每毫升样品中的细菌数是（接种时所用稀释液的体积为0.1mL）3.24×10⁷ 个．
②用这种方法测得的数量比实际活菌数量要少，因为当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落．
（4）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，操作者的双手需要进行清洗和消毒；已灭菌的材料用具应避免与周围物品接触．
（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染．对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种微生物的培养基在适宜的条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生．

Answer 1

分析 1、平板划线法是接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的造作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，在数次划线之后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的子细胞群体-菌落；为了得到由一个细胞繁殖而来的菌落，划线时应注意：第二次及以后的每次划线前要灼烧接种环，冷却后从上一区划线末端开始化，首尾区的划线不能相接．
2、对微生物进行分离、计数常用的接种方法是稀释涂布平板法，估算每毫升样品中的细菌数时，往往选取30～300的平板，取三个平板的平均值，每毫升样品中的细菌数=（平板的平均菌落数÷涂布的体积）×稀释的倍数；由于当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落，因此估算的菌落数少于实际菌落数．
3、微生物培养过程中要严格遵循无菌操作．

解答 解：（2）分析题图可知，该图显示的接种方法是平板划线法；为了得到由一个细胞繁殖而来的菌落，划线时应注意：第二次及以后的每次划线前要灼烧接种环，冷却后从上一区划线末端开始化，首尾区的划线不能相接．
（3）①每毫升样品中的细菌数是═（平板的平均菌落数÷涂布的体积）×稀释的倍数=（32.4÷0.1）×10⁵=3.24×10⁷个．
②由于当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落，因此估算的菌落数少于实际菌落数．
（4）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，操作者的双手需要进行清洗和消毒；已灭菌的材料用具应避免与周围物品接触．
（5）将未接种微生物的培养基在适宜的条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生来判断培养基是否被污染，如果为接种微生物的培养基有菌落生长，说明培养基被污染，否则，没有被污染．
故答案为：
（2）平板划线法    第二次及以后的每次划线前要灼烧接种环，冷却后从上一区划线末端开始化，首尾区的划线不能相接
（3）①3.24×10⁷ ②少   当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落
（4）消毒   与周围物品接触
（5）将未接种微生物的培养基在适宜的条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生

点评 本题旨在考查学生对微生物实验室培养技术的熟练掌握并应用相关知识解决实际问题的能力．