Question

【题目】由于人突变细胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常细胞中含HGPRT酶而缺乏TK，两种细胞均不能在HAT培养基中生长，但可在普通培养基中生长。利用上述两类细胞融合获得杂种细胞，在杂种细胞传代过程中，鼠的染色体被保留下来，人的染色体随机丢失，以至最后只剩一条或几条人染色体（如下图，图中数字代表保留的人染色体编号）。科研人员运用这一方法确定了胸苷激酶基因所在的染色体。分析回答：

（1）人、鼠细胞融合的原理是______。与植物原生质体融合过程相比，过程A特有的诱导方法是______。

（2）动物细胞培养过程中，培养液中添加一定量的抗生素的目的是______，培养箱中充入5%的CO2气体的主要作用是___________________________。

（3）过程B用HAT培养基进行培养，目的是_________________。

（4）为了使人的全部染色体分别包含于各种不同的人鼠杂交细胞中，人鼠融合细胞应在______（填“HAT”或“普通”）培养基中传代培养。为检查杂种细胞中含有的人染色体数目和形态，最好选取______（时期）的杂种细胞进行观察。

（5）若将某次实验获得的各种人鼠杂种细胞分别在HAT培养基中培养，一段时间后，发现在HAT培养基中只有A、B、C三种杂种细胞能够生长，检查杂种细胞中保留的人染色体情况如下表（表中“＋”表示有相应染色体，“－”表示无相应染色体）：

根据表中信息，可推测人细胞中胸苷激酶基因位于_________号染色体上。

Answer 1

【答案】细胞膜具有一定的流动性 用灭活的病毒处理 防止杂菌污染 维持培养液的PH 筛选出人鼠融合细胞（杂种细胞） 普通 有丝分裂中期 17

【解析】

1、动物细胞培养的条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物。（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的PH）。
2、分析表格：A、B、C三种杂种细胞共有的染色体是17号染色体.

（1）动物细胞融合的原理是细胞膜具有一定的流动性。植物原生质体融合的诱导方法有物理法和化学法，而诱导动物细胞融合的方法有物理法、化学法和生物法，因此与植物原生质体融合过程相比，过程A特有的诱导方法是生物法，即用灭活的病毒处理。
（2）动物细胞培养过程中，培养液中添加一定量的抗生素的目的是防止杂菌污染，培养箱中充入5%的CO2气体的主要作用是维持培养液适宜的pH。
（3）“由于人突变细胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常细胞中含HGPRT酶而缺乏TK，两种细胞均不能在HAT培养基中生长，但可在普通培养基中生长”。故过程B用HAT培养基进行培养，目的是筛选出人鼠融合细胞（杂种细胞）。
（4）突变细胞和正常细胞都不能在HAT培养基上生长，但都能在普通培养基上生长，因此为了使人的全部染色体分别包含于各种不同的人鼠杂交细胞中，人鼠融合细胞应在普通培养基中传代培养。有丝分裂中期，细胞中染色体形态稳定、数目清晰，是观察染色体形态和数目的最佳时期。
（5）在HAT培养基中只有A、B、C三种杂种细胞能够生长，而A、B、C三种杂种细胞共有的染色体是17号染色体，据此可推知人细胞中胸苷激酶基因位于17号染色体上。