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    7．基因工程自20世纪70年代兴起后，目前巳成为生物科学的核心技术，并在实际领域--农牧业、工业、环境、能源和医药卫生等方面，也展示出美好的前景．请回答下列有关基因工程的问题．
    （1）基因工程操作的核心步骤是基因表达载体的构建．若选择的限制酶切出的DNA片段是平末端，应选择T4DNA连接酶进行连接．
    （2）将目的基因导入到植物细胞采用最常用的方法是农杆菌转化法，该方法通常要把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，这是利用T-DNA可转移至受体细胞并整合到受体细胞的染色体DNA上的功能．
    （3）在基因工程操作中，若要在短时间内大量获取目的基因，可用PCR技术扩增DNA．该技术的原理是DNA（双链）复制．

    分析 基因工程技术的基本步骤：
    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

    解答 解：（1）基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达，其中核心步骤是基因表达载体的构建．E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，因此若选择的限制酶切出的DNA片段是平末端，则应选择T4DNA连接酶进行连接．
    （2）将目的基因导入到植物细胞常用农杆菌转化法，该方法通常要把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，这是利用T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上的功能．
    （3）PCR技术可在体外大量扩增目的基因，其原理是DNA复制．
    故答案为：
    （1）基因表达载体的构建      T4DNA连接酶 
    （2）农杆菌转化法     Ti质粒     
    （3）PCR技术      DNA（双链）复制

    点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，了解基因工程技术的相关应用，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记层次的考查．

    练习册系列答案
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    ④致病基因位于X染色体上   
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