Question

7．回答下列有关遗传信息的传递与表达及其免疫的问题．
草鱼病毒性出血病是由草鱼呼肠弧病毒（GCRV）引起的，草鱼患病后死亡率很高，是养殖生产中的主要病害之一．如图是科学家尝试用基因工程的方法制备核酸疫苗，并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果的过程示意图．图中P10和PH为启动子，箭头表示转录方向．PV7₁和PV7₂为GCRV外壳蛋白基因（DNA片段）．

（1）接种疫苗是预防微生物传染病的有效方法．给草鱼接种疫苗的目的是使草鱼产生主动免疫力．下列属于引起草鱼患病毒性出血病的抗原物质的是CD．
A．PV7₁和PV7₂    B．重组质粒    C．GCRV外壳蛋白    D．呼肠弧病毒
（2）GCRV的遗传物质是双链RNA，因此需要设计一对引物，在逆转录酶的作用下，通过PCR技术获得大量的PV7基因．
（3）在制备重组质粒的过程中，要提高核酸疫苗构建的成功率，下列操作合理的有ADE（多选）．
A．使用不同的限制酶切割PV7₁和PV7₂基因B．使用相同的限制酶切割PV7₁和PV7₂基因
C．将两个PV7基因同时连接到质粒上D．将两个PV7基因先后连接到质粒上
E．用两种限制酶先后两次切割质粒F．用一种限制酶连续两次切割质粒
（4）对草莓进行攻毒实验检测的过程中，首先是将不同浓度的核酸疫苗注射进入草鱼体内，PV7将通过转录和翻译过程产生GCRV外壳蛋白，使草鱼体内产生抗体和记忆B细胞．然后还要给各组草鱼注射等量的相同浓度的GCRV，观察统计草鱼的免疫保护率．
攻毒实验检测的结果见下表：
草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率和免疫保护率记录表

组别	注射疫苗量	实验鱼数	死亡鱼数	死亡率	免疫保护率
1	10ug	20尾	0尾	0%	100%
2	30ug	20尾	0尾	0%	100%
3	60ug	20尾	1尾	5%	95%
4	30ug普通质粒	20尾	6尾	30%	70%
5	0	20尾	20尾	100%	0%

（5）根据表中数据表明核酸疫苗的作用是非常有效的．科学家发现组别4注射导入普通质粒的草鱼免疫保护率达到了70%，但是与组别5比较鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加，应用免疫知识分析可能的原因是导入草鱼体内的普通质粒能提高草鱼的非特异性免疫能力．

Answer 1

分析 分析题图：图中P10和PH为启动子，箭头表示转录方向．PV7₁和PV7₂为GCRV外壳蛋白基因（DNA片段）．
分析表格：组别5是对照组，与对照组相比，注射疫苗量在10ug～60ug时，草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率都几乎为0，即免疫保护率几乎均为100%．组别4注射导入普通质粒的草鱼免疫保护率达到了70%．

解答 解：（1）给草鱼接种疫苗的目的是使草鱼产生主动免疫力．草鱼病毒性出血病是由草鱼呼肠弧病毒（GCRV）引起的，而GCRV的外壳蛋白是引起草鱼患病毒性出血病的抗原物质．
（2）GCRV的遗传物质是双链RNA，因此需要设计一对引物，在逆转录酶的作用下，通过PCR技术获得大量的PV7基因．
（3）由图可知，启动子P10能启动PV7₁基因的转录，启动子PH能启动PV7₂基因的转录，因此为了防止连接的位置有误，应使用不同的限制酶切割PV7₁和PV7₂基因，也需要不同的限制酶先后两次切割质粒，再将两个PV7基因先后连接到质粒上．
（4）基因控制蛋白质的合成包括转录和翻译两个过程，因此PV7将通过转录和翻译过程产生GCRV外壳蛋白（抗原），受到抗原刺激后，草鱼体内产生抗体和记忆B细胞．然后还要给各组草鱼注射等量的相同浓度的GCRV，观察统计草鱼的免疫保护率．
（5）组别4注射导入普通质粒的草鱼免疫保护率达到了70%，但是与组别5比较鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加，可能的原因是导入草鱼体内的普通质粒能提高草鱼的非特异性免疫能力．
故答案为：
（1）使草鱼产生主动免疫力   CD
（2）逆转录  PCR
（3）ADE
（4）转录和翻译     记忆B细胞    等量的相同浓度的GCRV
（5）导入草鱼体内的普通质粒能提高草鱼的非特异性免疫能力

点评 本题结合图标，考查基因工程和免疫的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记免疫调节的具体过程，能结合图中信息准确答题，属于考纲理解和应用层次的考查．