Question

探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数。
实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。
材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的大试管若干。无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱。
方法步骤：
(1)倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在___________操作。
(2)制备土壤稀释液。取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液1mL，转至9mL无菌水的大试管中，依次稀释到10⁷倍稀释度。为实现无菌操作，试管口和移液管应在离火焰____cm处。
(3)涂布。按照由107~103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布____个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布____个平板。
(4)培养。放入恒温箱内，在适宜温度条件下培养3d～4d。一般每隔____小时统计一次，选取____时的记录作为结果，这样可以防止____。
(5)细菌的计数。当菌落数目稳定时，选取菌落数在___________的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是___________。(稀释度是10⁵)
(6)预期结果。相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数____(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。理由是______________。

Answer 1

(1)酒精灯火焰旁
(2)1～2
(3)3     1
(4)24      菌落数目稳定     因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
(5)30～300     5×10⁷
(6)多于      无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存