Question

14．在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮丰富的有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释（梯度稀释）处理．
（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养基的成分应注意以该除草剂为唯一氮源．从物理性质上看，该培养基为固体培养基．制备该培养基的一般步骤为：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板．
（3）在第2次及其后划线总从上次划线末端开始的原因是划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少．
（4）培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是培养基中缺少这些细菌可利用的氮源或有氧条件抑制了这些细菌的生长．其中无透明带菌落的出现说明该培养基中还出现了能利用氮气的微生物．

Answer 1

分析 据图分析：该实验是从土壤中筛选分离能降解除草剂的微生物的过程．这样的实验要将土壤稀释处理，以除草剂为唯一的氮源进行处理筛选土壤微生物，以菌落计数法进行统计计数．

解答 解：（1）1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．
（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养基的成分应注意以该除草剂为唯一氮源．从物理性质上看，该培养基为 固 体培养基．制备该培养基的一般步骤为：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板．
（3）在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因是（划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少），每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落．
（4）在以该除草剂为唯一氮源的培养基上，不能降解该除草剂的细菌（除具有固氮能力的细菌外）是不能生长的．
（5）无透明带菌落利用的氮源主要是氮气，含一定量该除草剂的培养基不透明，形成透明圈是由于该除草剂被某些细菌降解．
故答案为：
（1）稀释（梯度稀释）
（2）以该除草剂为唯一氮源  固  溶化  倒平板
（3）划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少（每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落）
（4）培养基中缺少这些细菌可利用的氮源  氮气

点评 本题考查微生物培养的实验，意在考查实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用及实验分析能力．