[题目]某生物活动小组为测定当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量.进行了随机取样.系列梯度稀释.涂布平板.培养.计数等步骤.实验操作如下:请分析并回答下列问题:(1)为了筛选和分离尿素分解菌.培养基中需要添加作为唯一氮源.除了必需的营养物质外.培养基中还需要添加 .尿素分解菌能产生脲酶.把尿素分解成 .(2)在上述系列梯度稀释时.吸取前一试管中lmL菌液到� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】某生物活动小组为测定当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了随机取样、系列梯度稀释、涂布平板、培养、计数等步骤，实验操作如下：

请分析并回答下列问题：

（1）为了筛选和分离尿素分解菌，培养基中需要添加____________作为唯一氮源，除了必需的营养物质外，培养基中还需要添加____________。尿素分解菌能产生脲酶，把尿素分解成____________。

（2）在上述系列梯度稀释时，吸取前一试管（或锥形瓶）中lmL菌液到后一试管的工具是____________，该工具在使用前需要进行____________灭菌。

（3）实验结果：3号试管涂布的三个平板的菌落数为560、601、24，4号试管涂布的三个平板的菌落数为57、59、61，5号试管涂布的三个平板的菌落数为8、15、28。该10克土壤样品中含有尿素分解菌的估算数目是____________。通过该方法计算出来的数值往往比实际值低，原因是____________。在进行实验时，除了涂布的三个平板外，还需要至少准备一个空白培养培养基做对照，目的是____________。

【答案】尿素琼脂 C02和NH3 移液管干热 5.9×108 可能存在2个或2个以上的活菌形成一个菌落的情况检测培养基是否被污染

【解析】【试题分析】

本题主要考查尿素分解菌的筛选与分离过程的稀释与计数，以及所用的培养基，意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力。考生要明确图中5支试管为梯度稀释，最后经稀释涂布平板法接种培养后进行计数，然后再根据选项涉及的内容回忆相关知识点即可分析作答。

（1）为了筛选和分离尿素分解菌，培养基中需要添加尿素作为唯一氮源；用稀释涂布平板法分离纯化细菌时需要将细菌接种到琼脂固体培养基上，所以除了必需的营养物质外，培养基中还需要添加琼脂作凝固剂；尿素分解菌能产生脲酶，把尿素分解成C02和NH3。

（2）在上述系列梯度稀释时，吸取前一试管（或锥形瓶）中lmL菌液到后一试管的工具是移液管，移液管属于能耐高温的、需要保持干燥的物品，所以移液管在使用前需要进行干热灭菌。

（3）为了使实验结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。根据实验结果可知，应选择4号试管涂布的三个平板进行计数。4号试管涂布的三个平板上生长的平均菌落数C＝(57＋59＋61)÷3＝59个，涂布平板时所用的稀释液的体积V＝0.1mL，4号试管的稀释倍数M＝105，根据计算公式可知，每克样品中的菌种数＝(C÷V)×M＝(59÷0.1)×105＝5.9×107，则该10克土壤样品中含有尿素分解菌的估算数目是5.9×107×10＝5.9×108；该方法计数过程中，可能存在2个或2个以上的活菌形成一个菌落的情况，所以计算出来的数值往往比实际值低；在进行实验时，除了涂布的三个平板外，还需要至少准备一个空白培养培养基做对照，目的是检测培养基是否被污染。

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