8．图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，以上四种限制酶切割的碱基序列和酶切位点分别依次为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答下列问题：

（1）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是平末端，其产物长度为537bp、790bp、661bp．
（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有4种不同DNA片段．
（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是BamHI．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素B的培养基进行培养．

7．科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高．下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为抗氨苄青霉素基因），其中PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ为限制酶切割位点，①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤．请据图回答有关问题．

（1）在构建基因表达载体时，应该选用限制酶PstⅠ和SmaⅠ分别对含鱼的抗冻蛋白基因的DNA和质粒进行切割．
（2）农杆菌作为中间受体，重组质粒如何进入农杆菌：先用Ca²⁺处理细胞，使细胞成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进受体细胞吸收DNA分子，完成转化过程．
（3）③过程称为脱分化，④过程称为再分化．在植物组织培养过程中，除添加必要的营养物质，还需要向培养基中添加植物激素（生长素和细胞分裂素），同时除提供适宜的温度、光照和氧气等环境条件外，成功的另一关键是无菌操作．
（4）将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞后，通常采用抗原抗体杂交技术，在分子水平上检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质．

6．农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系．请回答下列问题：
（1）要使运载体与该抗病基因连接，首先应使用限制性内切酶（限制酶）进行切割．假如运载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该运载体连接的抗病基因分子末端是A．

（2）切割完成后，采用DNA连接酶将运载体与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称为重组DNA分子．
（3）再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去感染棉花细胞，利用植物细胞具有的全能性进行组织培养，从培养出的植株中筛选（选择）出抗病的棉花．
（4）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，应该用放射性同位素标记的抗病基因作为探针．
（5）科学家发现转基因植株的抗病基因的传递符合孟德尔遗传规律：
①将该转基因植株与非转基因植物杂交，其后代中抗病类型与不抗病类型的数量比为1：1．
②若该转基因植株自交，则其后代中抗病类型与不抗病类型的数量比为3：1．

5．凝乳酶能催化乳汁凝固，常用于奶酪的生产．为探究温度对凝乳酶活性的影响，某同学设计了如下实验：
①取若干试管，分为A、B、C、D、E、F六组，每组两支试管，其中一支试管放入2mL凝乳酶，另一支放入2mL乳汁．
②将六组试管分别置于不同温度水浴15min．
③将每组试管中的凝乳酶和乳汁混合后在原温度下继续水浴，记录凝乳所需时间，结果如表．请回答问题：

组别	A	B	C	D	E	F
水浴温度（℃）	10	20	30	40	50	60
凝乳时间（min）	不凝	7.0	4.0	1.5	4.0	不凝

（1）上述实验中，温度属于自变量，各组所加凝乳酶量和乳汁量属于无关变量．
（2）实验结果中凝乳所需时长与酶的活性呈负（正/负）相关．
（3）A组中乳汁不凝固的原因是低温抑制凝乳酶的活性．
（4）通过以上实验，该同学得出“凝乳酶的最适温度是40℃”的结论，另一同学认为尚且不足以得出此结论，理由是：应在30-50℃温度范围内缩小温度梯度继续实验，若40℃下测得的凝乳时间仍然最低（或最低时间仍然是1.5min），方能得出此结论．（具体梯度不作要求，设置符合科学原则）

4．请回答基因工程、胚胎工程方面的问题?
（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”．试管牛的培育需经过体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植以及在母体中发育和产出等过程．
（2）通常奶牛每次排出一枚卵母细胞?采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞常使用的激素是促性腺激素
（3）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则构建基因表达载体时必须将目的基因与乳腺蛋白基因启动子结合．将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是显微注射技术．为获得能大量产生人干扰素的转基因牛该基因表达载体应导入的受体细胞是受精卵（受精卵、乳腺细胞）．

3．某研究所根据植物“偏爱”的密码子设计，通过人工合成若干DNA片段，将其拼接成为人胰岛素基因，并将该基因置于CaMV35S启动子和果实专一性启动子2A12的驱动之下，通过农杆菌介导的方法转人番茄中，在番茄的果实中表达人胰岛素．并且在胰岛素一COOH端加上KDEL内质网滞留序列，避免胰岛素在植物细胞中的降解．回答下列问题：
（1）该科研所使用的人胰岛素基因是采用人工合成的方法获得．要想在体外获得大量该目的基因的片段，可以采用PCR技术．该技术中使用的关键酶是热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶）．
（2）根据上述描述，转基因操作时所用的载体是农杆菌的Ti质粒，载体上的T-DNA可以转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．构建的基因表达载体中应含有的结构有CaMV35S启动子、终止子、复制原点、果实专一性启动子、标记基因、目的基因．
（3）如果要检测在受体细胞中是否存在目的基因可采用DNA分子杂交技术．该技术中使用的基因探针也可以用来检测目的基因是否转录出mRNA．
（4）吃这种转基因番茄不能治疗人类的I型糖尿病（由体内胰岛素分泌不足引起），从人体相关生理分析原因可能是胰岛素是蛋白质，易被消化道内蛋白酶水解成氨基酸，不能起到治疗的作用．

2．采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌（　　）

	A．	接种环、吸管、培养基、接种室		B．	吸管、接种环、培养基、接种箱
	C．	培养基、接种环、吸管、接种箱		D．	培养皿、吸管、培养基、双手

1．某植物的一个体细胞如图所示．该植株的花粉进行离体培养后，共获得n株幼苗，其中基因型为aabbccdd的个体有（　　）

A．

$\frac{n}{2}$株

B．

$\frac{n}{8}$株

C．

$\frac{n}{16}$株

D．

0株

20．请根据如图回答有关问题：

（1）图甲中①～④所示的生物工程为蛋白质工程．该工程是通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造出一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求．
（2）图甲中序号④所示的获取目的基因的方法叫做逆转录．
（3）若欲通过乳腺生物反应器生产预期蛋白质，则构建基因表达载体时，图乙中序号[1]代表的是乳腺蛋白基因的启动子；且在图甲中⑨过程之前，要对精子进行获能处理，筛选出保留含性染色体X的精子．
（4）为获得较多的受精卵进行研究，图甲中⑥过程一般用激素对供体做超数排卵处理．若图甲中的卵母细胞来自从屠宰场收集的卵巢，则其在⑧之前需进行体外培养到减数第二次分裂中（或M II中）期才能受精．
（5）囊胚期的早期胚胎已经出现细胞分化，其中内细胞团将发育成胎儿的各种组织． 

19．下列有关植物体生命活动调节的叙述，正确的是（　　）

	A．	生长素的跨膜运输方式为主动运输
	B．	植物的生长发育也受神经调节
	C．	乙烯利是一种人工合成的植物激素，能催熟凤梨
	D．	喷洒赤霉素使健康水稻幼苗明显增高，能证明赤霉素促进细胞分裂