2．肉毒杆菌毒素并非由活着的肉毒杆菌释放，而是先在肉毒杆菌细胞内产生无毒的前体毒素，在肉毒杆菌死亡自落后前体毒素游离出来，经肠道中的胰蛋白酶或细菌产生的蛋白酶作用后方始具有毒性．回答下列相关问题：

（1）根据酶的专一性可推断出肉毒杆菌毒素的本质为蛋白质．
（2）肉毒杆菌毒素作用的机理是阻断神经末梢分泌能使肌肉收缩的神经递质，从而达到麻痹肌肉的效果．神经轴突束捎经多次分支，最后每个小枝末端膨大，呈杯状或球状，叫突触小体，该结构能与其他神经元的细胞体和树突等相接触，共同形成突触．
（3）兴奋在神经纤维上传导具有双向牲，请在下图右侧神经纤维上绘制出膜内卦正负电位、局部电流的方向及兴奋的传导方向．
．

1．如图甲是蛙的坐骨神经腓肠肌标本（浸在适宜培养液中保持活性）．在坐骨神经上（膜外）放置两个电极（b、c），并且将两个电极连接到一个电表上，静息时，电表上没有电位差．随后在坐骨神经一端（a）处给予一个刺激，电表将发生一系列变化．最终表明刺激坐骨神经时，会产生一个负电波，并且沿神经传导．

（1）在如图丙中画出b、c两点的负电波图形，并以虚线表示去极化过程，实线表示复极化过程．

（2）按图甲的方法并不能测出静息电位的值，若要测定，该如何处理？将电极b接在膜内，c接在膜外；或者将b接在膜外，c接在膜内；
如果其它条件不变，仅增加培养液中Na离子的浓度，则（1）题中的曲线将如何变化，请在如图丁中画出．（先画出（1）的曲线，在其边上画出改变浓度后的负电波，记为b₁和c₁，仍以虚线表示去极化过程，实线表示复极化过程．
（3）图乙神经纤维A处和B处的离子变化情况分别是什么？
A处钾离子外流；B处钠离子内流；
（4）图乙所示兴奋的传播方式称为什么传导；有什么特点：不衰减性；绝缘性；（答出两点）

18．由于人突变细胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常细胞中含HGPRT酶而缺乏TK，两种细胞均不能在HAT培养基中生长，但可在普通培养基中生长．利用上述两类细胞融合获得杂种细胞，在杂种细胞传代过程中，鼠的染色体被保留下来，人的染色体随机丢失，以至最后只剩一条或几条人染色体（如图，图中数字代表保留的人染色体编号）．科研人员运用这一方法确定了胸苷激酶基因所在的染色体．分析回答：

（1）与植物原生质融合过程相比，过程A特有的诱导方法是用灭活的病毒处理．
（2）动植物细胞培养过程中，培养液中添加一定量的抗生素的目的是防止杂菌污染，培养箱中充入5…的CO₂气体的主要作用是维持培养液适宜的pH．
（3）若细胞两两融合，则会出现3种类型的融合细胞，过程B用HAT培养基进行培养，其目的是筛选出人鼠融合细胞（或“杂种细胞”）．
（4）为了使人的全部染色体分别包含于各种不同的人鼠杂交细胞中，人鼠融合细胞应在普通（填“HAT”或“普通”）培养基中传代培养．为检查杂种细胞中含有的人染色体数目和形态，最好选取有丝分裂中期（时期）的杂种细胞进行观察．
（5）若将某次实验获得的各种人鼠杂种细胞分别在HAT培养基中培养，一段时间后，发现在HAT培养基中只有A、B、C三种杂种细胞能够生长，检查杂种细胞中保留的人染色=体情况如下表（表中“+”表示有相应染色体，“-”表示无相应染色体）：

杂种细胞	保留的人染色体
	2号	3号	5号	9号	12号	17号	21号
A	+	+	+	+	-	+	-
B	-	+	-	-	+	+	-
C	+	-	+	-	+	+	+

根据表中信息，可推测人细胞中胸苷激酶基因位于17号染色体上．

17．如图是生物兴趣小组为研究“某品牌酸奶中乳酸菌种类及其耐药情况”而制定的流程图．请分析回答：

（1）与酵母菌相比，乳酸菌在结构上的主要区别是细胞内没有核膜包被的细胞核（或“没有核膜”）．
（2）本研究使用的细菌培养基中特别加入了一定量的碳酸钙，乳酸菌在无氧呼吸（生理过程）中产生的乳酸能与不溶性的碳酸钙反应生成可溶性的乳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈．从物理形态分析，本研究使用的培养基属于固体培养基（类型）．
（3）在利用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，锅内水加热煮沸后，必须将锅内冷空气彻底排除，以保证锅内气压上升至100kPa，达到l21℃．灭菌后的培养基应适当冷却后，在酒精灯火焰附近倒平板．
（4）请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”实验操作步骤：
步骤1：分别取等量的青霉素、四环素和无菌水加入三组无菌培养皿中，再加入灭菌并已经冷却到 50℃左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板．
步骤2：向三组培养基中分别接种待检测的乳酸菌菌种．
步骤3：将接种后的三组培养基和一个未接种的培养基都置于适宜温度等条件下培养若干天，观察比较培养基中菌落生长情况．

16．γ-氨基丁酸（GABA）是具有降血压、抗焦虑等功能的水溶性氨基酸．科研人员通过实验研究了白方腐乳在前发酵、盐腌和后发酵过程中GABA的含量变化，为寻找生产富含GABA腐乳的工艺奠定基础．实验步骤如下：

①豆腐白坯表面接种毛霉孢子后，在适宜的温度和湿度下培养48h，获得毛坯．
②将毛坯分层整齐地摆放在瓶中，盐腌5d．
③腌制后加入卤汤，置于28℃恒温箱中后发酵90d．
④分别采集各时段的腐乳坯样品，测定GABA含量，结果如下．
请分析回答：
（1）毛霉生长的适宜温度为15～18℃．
（2）前发酵过程中，毛坯的GABA含量发生明显变化的原因是毛霉产生的蛋白酶促进豆腐中的蛋白质水解产生GABA．
（3）步骤②中，加盐腌制的正确方法是：逐层加盐，随着层数的加高盐量应增加，使其自然含盐量平均为16%．此过程腐乳干重中的GABA含量下降，一方面一食盐抑制毛霉生长，酶活性降低有关；另一方面部分GABA会溶解于水（不存在于腐乳块中）而导致测定值减小．
（4）后发酵过程中，GABA含量再次增加的原因是（毛霉产生的）蛋白酶继续发挥作用，后发酵60d后的白方腐乳出厂销售比较适宜．

15．1963年诺和诺德公司向洗涤剂中加入碱性蛋白酶，推出了第一款加酶洗衣粉．碱性蛋白酶一般利用枯草芽孢杆菌生产．图甲、乙为某科研小组对碱性蛋白酶相关性质进行测试的结果．图丙、丁为两种常见的平板划线法；连续划线法和四区划线法，前者适用于纯化菌种较少的样品，后者适用于纯化菌种较多的样品．请回答下列问题：
（1）由图甲、乙可知，碱性蛋白酶发挥作用的适宜条件为pH为10.2左右和43℃左右的温度．
（2）图丁中依次进行四区划线，四区的面积要求为C＜D＜E＜F，F区面积最大的原因是使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用（或便于菌种分散）．每次划线后都要灼烧接种环，注意F区划线不要与C（填字母）区相连．
（3）某兴趣小组欲从土壤中分离枯草芽孢杆菌，宜选择图丁所示的方法划线培养，分离得到的纯化单菌落属于种群（填“种群”或“群落”）．
（4）碱性蛋白酶是枯草芽孢杆菌生长后期向细胞外分泌的一种酶，与该酶合成有关的细胞器是核糖体．若欲应用固定化技术提高该酶的利用率，减少产物中的杂质，则应采用化学结合或物理吸附法方法．

14．下表中列出了几种限制酶识别程序及其切割位点，图一、图二中箭头表示相关限制酶的酶切位点．


（1）若图二中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科学家要将该基因注射到羊的受精卵中，则发育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁．
（2）限制酶SmaⅠ和限制酶XmaⅠ作用的不同点是切割位点不同．
（3）图二中的目的基因D需要同时使用限制酶MseⅠ和限制酶PstⅠ才能获取，而图一所示的质粒无相应的限制酶切位点．所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒进行改造，构建新的限制酶切位点．试写出构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：
①首先用EcoRⅠ酶处理质粒；
②然后用DNA聚合酶处理质粒，使被切开的质量末端链接上相应的脱氧核苷酸
③再运用DNA连接酶处理质粒，形成新的限制酶切位点，即可被限制酶MseⅠ识别．
（4）基因工程中的筛选是一个重要的步骤．如图表示运用影印培养法（使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种培养方法）检测基因表达载体是否导入大肠杆菌．培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有四环素、青霉素．从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是4和6菌落中的细菌．

13．下列与果酒、果醋和腐乳制作相关的叙述，错误的是（　　）

	A．	腐乳制作所需要的适宜温度最高
	B．	果醋发酵包括无氧发酵和有氧发酵
	C．	菌种均可来自于自然环境、接种纯净的菌种则品质更佳
	D．	使用的菌种都具有细胞壁、核糖体、DNA和RNA

12．植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理相符的是（　　）

	A．	植物组织培养和动物细胞培养-细胞的全能性
	B．	纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理-酶的专一性
	C．	原生质体融合和动物细胞融合-细胞膜的流动性
	D．	紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养-细胞增殖

11．下列关于生物工程的叙述，错误的是（　　）

	A．	目前的基因导入植物细胞的常用方法是显微注射法
	B．	植物的单倍体育种和植物基因工程育种都必须利用植物组织培养技术
	C．	脱毒苗是利用基因工程技术将脱毒基因导入植物细胞培养成的新品种
	D．	蛋白质工程也需要构建含控制预期蛋白质合成的基因表达载体