Ⅰ.苯胺是致癌物质，土壤中有分解苯胺的异养型细菌，下表是筛选分解苯胺的异养型细菌的培养基配方。

(1)此培养基中的成分X除了为目的菌提供能源外，还能提供________________

和 ，该培养基从作用看属于 。

(2)下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图。则获得图A效果的接种方法是 __________________________________________________

_________________________________________________________________ ，

图B效果的接种方法是 ________________________________________________

_________________________________________________________________ 。

Ⅱ.根据植物组织培养和生物有效成分的提取的知识回答下列问题：

(1)菊花的组织培养常用的培养基是 ，原理是 。

(2)从茶籽中提取茶油最好采用 法，工业上提取胡萝卜素一般采用萃取法，鉴定该色素的方法是 法。

胡萝卜素分为α、β、γ三类，它广泛存在于植物各组织器官中，请结合从胡萝卜中提取胡萝卜素的流程示意图回答下面的问题：

胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素

(1)胡萝卜素易溶于 ，对提取胡萝卜素的溶剂的要求有三点：一要具有较 (选填“高”或“低”)的沸点，二要能够充分溶解胡萝卜素，三要 。

(2)流程中对胡萝卜粉碎的意义是_______________ 。干燥的意义是 。

(3)如图1是某同学设计的纸层析法鉴定胡萝卜素粗品的实验装置图，图2是胡萝卜素层析结果示意图。请结合图解回答：

①图1装置的一个明显错误是 ________________________________________；

在实验时，一位同学把样品原点浸入到了溶剂内，结果他没有得到图2所示的结果，原因是 。

②在滤纸上点样时要求用最细的注射器点样，并要在每次点样后用吹风机吹干，其目的是 。

③点样时，标准样品应点在图2中的 处。

低温蛋白酶是海洋嗜冷细菌分泌的酶类，最适温度在20℃左右，作为洗衣粉添加剂可在较低的温度下达到理想的洗涤效果。下图为分离可分泌低温蛋白酶的某种嗜冷菌的操作步骤，据图回答问题：

(1)分装前，对培养基要进行 操作。为避免杂菌污染，要及时进行 操作。

(2)将扩大培养后的深海微生物用 法接种到含酪蛋白的固体培养基表面，在适宜条件下培养一段时间，挑出形成透明圈的单一菌落，即为初选出的嗜冷菌。从嗜冷菌分泌的蛋白质中分离出低温蛋白酶的最常用的方法是 。

(3)为进一步检测分离出的低温蛋白酶的最适温度，将该菌按上图所示分5组分别置于 中进行培养， 组所对应的温度为最适温度。

(4)为提高酶的利用率，可以采用 技术，常用的方法有 ____________。

根据相关知识，回答胡萝卜素提取和酶应用方面的问题：

(1)从胡萝卜中提取胡萝卜素时，通常在萃取前要将胡萝卜粉碎和 ，以提高萃取效率；水蒸气蒸馏法 (填“适合”或“不适合”)胡萝卜素的提取，原因是 ___________________________________

__________________________________________________________________；

鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时，通常可采用 法，并以_______ 样品作为对照。

(2)若要提高衣物上血渍的去除效果，可在洗衣粉中加入____________________

酶，因为该酶能将血红蛋白水解成可溶性的 或 ；若要提高衣物上油渍的去除效果，洗衣粉中可添加 酶；使用加酶洗衣粉时，水温过低或过高时洗涤效果不好的原因分别是 ________________

_________________________________________________________________。

烟草花叶病毒(TMV)是一种在烟草及蔬菜等经济作物中广泛传播的病毒，对农业生产造成很大的危害。研究者利用植物基因工程的方法将烟草花叶病毒外壳蛋白基因(CP基因)导入烟草并在转化的烟草植株中表达，使其获得对烟草花叶病毒的抗性。下图是转化烟草植株的培育流程，请回答：

(1)含有CP基因的cDNA文库是通过将TMV的RNA进行 获得的。在对cDNA进行PCR扩增时，设计的引物自身不能含有 序列。

(2)将CP基因导入土壤农杆菌质粒的 ，其原因是 __________________

_________________________________________________________________ 。

(3)含重组质粒的土壤农杆菌与烟草叶共培养过程中，对烟草叶的处理要求是 ________________________________________。

(4)用含重组质粒的土壤农杆菌感染烟草叶成功后，共培养形成愈伤组织时的培养条件是必须 。

(5)在诱导芽、根的培养基中需添加 才能进行筛选，并要注意在不同的培养阶段需调整 的比例。

某竹芋科植物果实中含有一种甜蛋白，其甜度为蔗糖的三千倍，是理想的甜味剂。某研究小组试图把甜蛋白基因(目的基因)导入黄瓜中，以改良这种黄瓜的品质。获得转基因黄瓜植株的流程图如下，请回答：

(1)通过步骤①和②可人工合成目的基因，在步骤②中先以mRNA为模板在______

酶的作用下合成互补DNA，然后通过一系列实验从中筛选出 基因。此外，还可以根据甜蛋白的氨基酸序列推测出 序列，再用 合成。

(2)通过 技术，可以获得大量目的基因。利用该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成 。

(3)导入了目的基因的叶片组织细胞经过步骤③ 和④_______

后形成了完整的植株，说明 。

(4)可以通过 技术检测黄瓜植株中是否含有甜蛋白。

下图为单克隆抗体制备流程示意图。

(1)单克隆抗体制备技术的基础是 。

(2)细胞融合是随机的过程，在HAT培养基上培养，目的是 。在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的 ，以保证生命活动的正常进行。

(3)为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/mL，每孔滴入0.1 mL细胞稀释液，其目的是 _____________

_________________________________________________________________ 。

(4)若用15N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，放射性物质在细胞结构中出现的先后顺序是 _______________________________________________

_________________________________________________________________ 。

胚胎移植的基本程序如下图(以牛胚胎移植为例)，请据图回答问题：

(1)对供体母牛、供体公牛的要求是 。

(2)同期发情处理的方法是 ，冲卵中的“卵”是指 。

(3)受精有关过程有：①第一次卵裂开始，②释放第二极体，③顶体反应，④穿越透明带，⑤雌、雄原核的形成，⑥核膜消失，雌、雄原核融合。其正确的顺序为 (填序号)，受精的标志是 。

(4)若供体母牛具有许多优良性状，可利用体细胞克隆技术加速遗传改良进程，请回答下列有关问题：

①目前核移植技术中普遍使用的去核方法是 。

②用于核移植的体细胞一般选用 代以内的细胞，原因是 。

从世界上第一位“试管婴儿”诞生，至今全球试管婴儿数量已达到400万。从克隆羊“多利”诞生，至今已成功克隆了多种动物。请分析回答试管婴儿与克隆技术的有关问题：

(1)试管婴儿和克隆动物的培育过程中均会用到的生物技术有 、 。

(2)试管婴儿和克隆动物的生殖方式分别属于_____________________________

和 。

(3)培育试管婴儿时，可通过给母体注射 增加排卵数量，从父亲体内获得的精子需要进行 处理，才能完成受精作用。

(4)克隆动物时，将甲个体的细胞核移入乙个体去核的卵母细胞中，由重组细胞培育成个体丙，则个体丙的基因来源于 __________________________________

_________________________________________________________________ 。

(5)请列举一例克隆技术在医疗方面的应用： 。

由李建远教授率领的科研团队，在山东烟台毓璜顶医院成功克隆出5枚符合国际公认技术鉴定指标的人类囊胚。请回答下列问题：

(1)在卵子去核的过程中，李建远教授采用三维立体偏震光纺锤体成像系统，对核DNA精确定位后，再用微激光主要对卵子的第一屏障打孔，才能精确剔除卵子细胞核。这一屏障是指 ( )

A.卵细胞膜 B.透明带 C.核膜

(2)在培养皮肤纤维细胞和淋巴细胞时，需要用胰蛋白酶等处理，目的是 。培养过程中除了保证无菌、无毒的环境外，为了防止污染通常还要在细胞培养液中添加一定量的 。

(3)通过克隆胚胎进而用其衍生而来的器官取代患者病变的器官，就会避免免疫排斥反应的发生，根本原因是 。

(4)获得目的基因后可采用 技术进行扩增。大部分物种的基因能拼接在一起，是因为 。检测目的基因是否成功导入植物细胞，可采用的生物技术是 。