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44.(14分)研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图甲所示，据图回答。

(1)在基因工程中除了选择质粒作为载体，还可以用　　　　　　　　　　 作为载体(写出一种就可)；如果某质粒由1000个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为　　　 　　　　。

(2)图甲中在构建基因表达载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是　　　　　　 。构建的基因表达载体的组成

有　　　 　　　　　　　　　及标记基因，标记基因的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(3)EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

(目的基因可用省略号表示)

(4)原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分(组织细胞分散开)，重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为　　　　　 。图甲中进行传代培养操作时，需要用　 　酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。动物细胞培养的条件有　　　　　　 、　　　　　　 、无菌无毒的环境、温度和PH。细胞的培养液中除了要添加抗生素、糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需添加 　　　　　　　　　　等一些天然成分。

(5)研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是　　　　　　　　　　　　　　　　 　　 　。