用来治疗糖尿病的胰岛素，过去主要靠从动物体器官、组织中提取，但因受原料限制，无法推广。现在，可以用发酵工程的方法来生产胰岛素。若用大肠杆菌发酵来生产胰岛素，并结合基因工程，写出其生产过程：

(1)构建转入人胰岛素基因的工程菌。

①提取目的基因：用胰岛素基因探针从人的胰岛细胞中获取             ，再用      法制备人的胰岛细胞目的基因。

②目的基因与运载体结合：从大肠杆菌的细胞中提取       ，并用      酶切割质粒，使其露出               。用同一种酶切割目的基因使其产生相同的               ，再将目的基因插人质粒切口处，加入适量的               酶，这样就形成了一个               和               的重组DNA。

③将目的基因导人受体细胞：将大肠杆菌用          处理，以增大               的通透性，让重组DNA进人大肠杆菌体内。

④目的基因的检测和表达：在用一定的方法检测出目的基因已导人大肠杆菌细胞内，并            后，再对该种大肠杆菌扩大培养。

(2)发酵生产。如图为发酵罐，回答：（括号中填数字,如[1]）

①配制适合大肠杆菌的培养基，调整        ，然后对培养基进行             处理并装入发酵罐，将上述大肠杆菌接种于发酵罐发酵

②若经检测若发现放料口排出的旧培养基中微生物细胞形态多样，甚至出现畸形，则此时微生物的生长处于     期，加料口[   ]添加新培养基的速度应该适当     ，并从[   ]以适当速度通入     

③若该装置阶段发酵的目的是为扩大培养生产酵母菌菌种，则应尽可能延长         期，采取的主要措施为：加料口放料的速度都           ，通人的无菌空气成分中应           ，搅拌的速度适当             

④影响发酵过程中温度变化的因素是                

⑤发酵过程中pH变化的原因是                     

⑥搅拌器搅拌的作用是                          

(3)发酵完毕后，从培养基中            并             胰岛素，经过一定的加工成为药用胰岛素，经           合格后，可投入使用。

多细胞生物的生长主要依靠细胞生长和细胞增殖两个方面。而细胞生长不能无限进行，其主要原因是

A．受到细胞表面积与体积之比的限制，且要维持细胞核与细胞质体积之间的平衡状态

B．细胞内的蛋白质和遗传物质是有限的，到生命的一定阶段就会消失

C．细胞体积越大，越容易衰老死亡

D．以上解释都不准确

多细胞生物的生长主要依靠细胞生长和细胞增殖两个方面。而细胞生长不能无限进行，其主要原因是

[生物——选修1：生物技术实践]（15分）
（1）微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和____，平板划线前要对接种环进行灼烧，原因是为了__________。
（2）用培养基培养微生物时，培养基中应有__________、__________ 、__________    和        等营养，同时还必须满足微生物生长对__________ 、__________ 、__________ 的要求。
（3）用唯一碳源培养基分离微生物的主要操作步骤为①原料称量、溶解②__________③分装、包扎④灭菌⑤倒平板⑥  __________⑦培养。
（4）将月季的花粉细胞通过无菌操作接入对应的培养基中，在一定条件下诱导形成幼苗，最适合进行培养的花药时期为__________，选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期，最常用的方法为__________。
（5）PCR技术中的引物是__________，DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过温度控制来实现的。一个循环包括__________ 三步。

[生物——选修1：生物技术实践]（15分）

（1）微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和____，平板划线前要对接种环进行灼烧，原因是为了 __________。

（2）用培养基培养微生物时，培养基中应有__________、__________  、 __________     和         等营养，同时还必须满足微生物生长对 __________ 、 __________ 、 __________  的要求。

（3）用唯一碳源培养基分离微生物的主要操作步骤为①原料称量、溶解②__________③分装、包扎④灭菌⑤倒平板⑥  __________⑦培养。

（4）将月季的花粉细胞通过无菌操作接入对应的培养基中，在一定条件下诱导形成幼苗，最适合进行培养的花药时期为 __________，选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期，最常用的方法为 __________。

（5）PCR技术中的引物是__________，DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过温度控制来实现的。一个循环包括 __________ 三步。