为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进一步降解，分析片段大小。下列是某小组进行的相关实验。

已知一线性DNA序列共有5 000bp（bp为碱基对）	第一步水解	产物（单位：bp）	第二步水解	产物（单位：bp）
	A酶切割	3 100	第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	1 900　200
		1 400		800　600
		1 000		1 000
		500		500
	B酶切割	2 500	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	1 900　600
		1 300		800　500
		1 200		1 000　200
	经A酶和B酶同时切割	1 900　1 000　800　600　500　200

⑴该实验设计主要体现了____________________原则。

⑵由实验可知，在这段已知序列DNA分子上，A酶和B酶的识别位点分别为____________________个和____________________个。

⑶根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点。

　　　　　

⑷已知BamH 与BglⅡ的识别序列及切割位点如右图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，

	—AGATCC— —TCTAGG—

若干循环后 ____________________和____________________序列明显增多，该过程中DNA连接酶催化____________________键的形成。

⑸一个基因表达载体的组成除了目的基因外，还必须有_________、___________及标记基因。

番茄果实成熟过程中，某种酶(PG)开始合成并显著增加，促使果实变红变软。但不利于长途运输和长期保鲜。科学家利用反义RNA技术(见图解)，可有效解决此问题。该技术的核心是，从番茄体细胞中获得指导PG合成的信使RNA，继而以该信使RNA为模板人工合成反义基因并将之导入离体番茄体细胞，经组织培养获得完整植株。新植株在果实发育过程中，反义基因经转录产生的反义RNA与细胞原有mRNA(靶mRNA)互补形或双链RNA，阻止靶mRNA进一步翻译形成PG，从而达到抑制果实成熟的目的。请结合图解回答：

(1)若要将人工合成的完整反义基因克隆出成百上千的反义基因，可用        (写出中文名称)技术实现体外快速扩增。

(2)假设PCR反应中的初始只有一个DNA作为模板， n轮循环的产物中含有模板DNA链的DNA分子有     个、含有人工合成的DNA引物的DNA分子有    个。若DNA分子中共含900个碱基对，碱基数量满足：(A+T)／(G+C)=1／2，经5次循环，至少需要向试管中加入     个腺嘌呤脱氧核苷酸(不考虑引物所对应的片段)。

(3)PCR反应中所用到的酶是      ，其具有       的特性。

(4)普通番茄细胞导入目的基因后，先要接种到诱导培养基上培养，脱分化后得到           ，再转接到分化培养基上，诱导出试管苗，然后进一步培养成正常植株。

47．(7分)番茄果实成熟过程中，某种酶(PG)开始合成并显著增加，促使果实变红变软。但不利于长途运输和长期保鲜。科学家利用反义RNA技术(见图解)，可有效解决此问题。该技术的核心是，从番茄体细胞中获得指导PG合成的信使RNA，继而以该信使RNA为模板人工合成反义基因并将之导入离体番茄体细胞，经组织培养获得完整植株。新植株在果实发育过程中，反义基因经转录产生的反义RNA与细胞原有mRNA(靶mRNA)互补形或双链RNA，阻止靶mRNA进一步翻译形成PG，从而达到抑制果实成熟的目的。请结合图解回答：

(1)若要将人工合成的完整反义基因克隆出成百上千的反义基因，可用        (写出中文名称)技术实现体外快速扩增。

(2)假设PCR反应中的初始只有一个DNA作为模板， n轮循环的产物中含有模板DNA链的DNA分子有     个、含有人工合成的DNA引物的DNA分子有    个。若DNA分子中共含900个碱基对，碱基数量满足：(A+T)／(G+C)=1／2，经5次循环，至少需要向试管中加入     个腺嘌呤脱氧核苷酸(不考虑引物所对应的片段)。

(3)PCR反应中所用到的酶是      ，其具有       的特性。

(4)普通番茄细胞导入目的基因后，先要接种到诱导培养基上培养，脱分化后得到           ，再转接到分化培养基上，诱导出试管苗，然后进一步培养成正常植株。