“基因靶向”技术，指的是应用DNA同源重组原理，通过一定的载体，用设计好的目的基因替代靶基因，从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术，科学家可以用小鼠进行实验，使其体内的某项特定基因丧失功能，以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程，请回答有关问题：

(1)获得胚胎干细胞(ES细胞)。实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为ES细胞具有发育的________。请举出一例获取ES细胞的常用方法： ____________________________________。

(2)获取目的基因。

①目的基因是靶基因的同源片段。经过修饰使靶基因的功能改变或丧失，就可获得目的基因。如果要获得活性降低了的X酶蛋白的目的基因，可以根据此蛋白的结构及功能进行X酶基因的改造，这一技术叫做________。

②为了提高实验成功率，需要通过________技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。

(3)构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成，除了目的——基因以外，还必须有________基因，以便于细胞的筛选。质粒具有的一至多个________位点，使目的基因插人其中成为可能，因此常被选作运载体。

(4)____________________，并从中筛选，然后培育出小鼠。

①由ES细胞培育出小鼠的过程中，需要采用________技术和________技术。

②为了确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组，可通过观察小鼠的性状来检测，这属于________水平的鉴定。

回答基因工程中的有关问题：（15分）

Ⅰ．限制酶是基因工程中的重要工具酶，下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图甲、图乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图甲所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有       个和_______ 个游离的磷酸基团？

（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越        。

（3）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止         。

Ⅱ．原核生物（如大肠杆菌）是基因工程中较理想的受体细胞，它们具有一些其他生物没有的特点：①繁殖快②多为单细胞③______________等优点．大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用_________处理细胞，使之成为_________­­___细胞，然后完成转化．

Ⅲ．植物基因工程中将目的基因导入受体细胞最常用的方法是__________,且一般将目的基因插入Ｔi质粒的____________中形成重组Ｔi质粒，这样可将目的基因整合到受体细胞的染色体上，科学家发现：这样得到的转基因植株，其目的基因的传递符合孟德尔遗传规律，则该转基因植株一般为___________子。若要避免基因污染，一般需将目的基因导入植物细胞的__________DNA中。

回答基因工程中的有关问题：（15分）

Ⅰ．限制酶是基因工程中的重要工具酶，下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图甲、图乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图甲所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有       个和_______ 个游离的磷酸基团？

（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越        。

（3）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止         。

Ⅱ．原核生物（如大肠杆菌）是基因工程中较理想的受体细胞，它们具有一些其他生物没有的特点：①繁殖快②多为单细胞③______________等优点．大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用_________处理细胞，使之成为_________­­___细胞，然后完成转化．

Ⅲ．植物基因工程中将目的基因导入受体细胞最常用的方法是__________,且一般将目的基因插入Ｔi质粒的____________中形成重组Ｔi质粒，这样可将目的基因整合到受体细胞的染色体上，科学家发现：这样得到的转基因植株，其目的基因的传递符合孟德尔遗传规律，则该转基因植株一般为___________子。若要避免基因污染，一般需将目的基因导入植物细胞的__________DNA中。