[选做―现代生物科技专题]（14分）：下图是将人的生长素基因导入细菌B细胞内培育“工程菌”示意图，所用运载体为质粒A，已知细菌B细胞内不含质粒A及其上面的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因得到表达。请回答：

（1）基因工程的操作程序主要包括四个步骤是             、基因表达载体的构建、                和目的基因的检测。

（2）获取目的基因的方法，一是______________________________________________；

二是_______________________________________________。

（3）如何使目的基因和质粒结合形成重组质粒？_______________              。

（4）目前把重组质粒导入细菌时，效率还不高，有的只导入普通质粒A，只有极少数导入的是重组质粒，而大部分根本没有导入质粒。此处可通过如下步骤鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：将得到的细菌涂抹在一个含四环素培养基上，能够生长的就导入了，反之则没有。使用这种方法鉴别的原因是____________________。

（5）若把已导入了普通质粒A或重组质粒的细菌放在含氨苄青霉素的培养基上培养，将会发生________      　　　　　　　　　　　　现象。

（7分）右下图是将人的生长激素基因导人细菌D细胞内，产生“工程菌”的示意图。所用的基因运载体为质粒A。若已知细菌D细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌后能正常表达。请回答下列问题：

（1）图中利用A和B产生的C称       ，它通常在体外完成，完成此过程使用的工具酶有          、               。
（2）在导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入了普通质粒，只有少数导入的是C，所以在基因工程的操作步骤中必须要有                  步骤。根据目的基因在质粒中插入的位置，完成此步骤的最好方法是                                  。
（3）若将C导人细菌D后，目的基因在“工程菌”中表达成功的标志是               。
（4）通过基因工程获得的工程菌D表现出一定的变异性，这种变异属于              。

限制酶Mun Ⅰ和限制酶EcoR Ⅰ的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如图表示四种质粒和目的基因，其中，箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因运载体的质粒是 (　   )

（7分）右下图是将人的生长激素基因导人细菌D细胞内，产生“工程菌”的示意图。所用的基因运载体为质粒A。若已知细菌D细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌后能正常表达。请回答下列问题：

（1）图中利用A和B产生的C称        ，它通常在体外完成，完成此过程使用的工具酶有           、                。

（2）在导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入了普通质粒，只有少数导入的是C，所以在基因工程的操作步骤中必须要有                   步骤。根据目的基因在质粒中插入的位置，完成此步骤的最好方法是                                   。

（3）若将C导人细菌D后，目的基因在“工程菌”中表达成功的标志是                。

（4）通过基因工程获得的工程菌D表现出一定的变异性，这种变异属于               。

质粒是基因工程中常用的运载体，存在于许多细菌及酵母菌等生物中。请根据实验原理和材料用具，设计实验选择运载体质粒，明确质粒的抗菌素基因所控的抗菌素类别。

实验原理：作为运载体的质粒，须有标记基因，这一标记基因是抗菌素抗性基因，故只有具有抗菌素抗性的细菌，其质粒才可用作运载体。

材料用具：青霉素、四环素的10万单位溶液、菌种试管、灭菌的含细菌培养基的培养皿、酒精灯、接种环、一次性注射器、蒸馏水、恒温箱等。

方法步骤：

第一步：取三个含细菌培养基的培养皿并标1、2、3号，在酒精灯旁，用三支注射器分别注入1ml蒸馏水、青霉素液、四环素液，并使之在整个培养基表面分布均匀。

第二步：________________________________________________________.            

第三步：________________________________________________________.

      预期结果：

①________________________________________________________

②________________________________________________________                   

③________________________________________________________

④________________________________________________________

⑤________________________________________________________