细胞工程是指应用________和________的原理和方法，通过某种工程学手段，在________和________水平上，按照人们的意愿，来改变细胞的________或获得新产品的一门综合科学技术。

回答下列有关基因工程和克隆技术的问题。（10分）

2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

63、说出绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中用到了哪些生物工程技术？           　

利用了哪些原理？                      （本题答案从下列所给选项中选择填写）

①转基因技术；②细胞核移植技术；③胚胎移植技术；④干细胞技术；⑤动物细胞培养技术

⑥基因突变；⑦基因重组；⑧动物细胞核具有全能性；⑨动物细胞具有全能性

64、过程①②中必需用到的酶分别是                和                 。绿色荧光蛋白基因之所以能与质粒重组，原因是                                               。

65、早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及               等物质。

通过上图中过程①的方法获取目的基因的数量是有限的，要获得大量的绿色荧光蛋白基因可以利用PCR技术。PCR扩增反应（如下图所示）中加入的TaqDNA聚合酶能在接近沸点的条件下，发挥延伸DNA子链的作用，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。请回答：

PCR（DNA聚合酶链式反应）技术示意图：

66、你认为TaqDNA聚合酶一定是从下列哪种生物体细胞中分离提取的？        

A．水母细胞         B．猪胎儿成纤维细胞   　C．极端嗜热菌     D．大肠杆菌

67、下面的表达式不能反映TaqDNA聚合酶的功能，为什么？                           。

68、用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点和标出碱基对数。（2分）

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的过程，图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉索抗性基因，BamHI、Bau3A I、Bst I、Haclll、Not I所指位点为限制酶的酶切位点，五种酶的识别序列及切割位点在下表中。据图表回答：

（1）将双链DNA在中性盐溶液中加热，两条单链分开，叫做DNA变性。变性后的DNA如果慢慢冷却，又能恢复为双链DNA，叫做退火。大量的如右图中N元素标记的DNA在变性后的退火过程中会形成                  种DNA。

（2）若对图中质粒进行改造，插入的Not I酶切位点越多，质粒的热稳定性越          。
（3）要将人乳蛋白基因插入载体，如果只允许用一种限制酶酶切载体和人乳铁蛋白基因，应选择的限制酶是                  。
（4）筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含              的培养基上进行。
（5）若从细胞中提取DNA和RNA，通过基因工程的方法，转移到另一种细胞时，转入DNA比转入RNA要有优势，理由是                      
（6）供体牛的受精卵的性染色体组成为           。在胚胎移植过程中，供、受体牛选择好后，要用激素进行同期发情处理的原因是            ，以保证移植的胚胎能够继续正常发育
（7）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用                    技术。

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的过程，图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉索抗性基因，BamHI、Bau3A I、Bst I、Haclll、Not I所指位点为限制酶的酶切位点，五种酶的识别序列及切割位点在下表中。据图表回答：

（1）将双链DNA在中性盐溶液中加热，两条单链分开，叫做DNA变性。变性后的DNA如果慢慢冷却，又能恢复为双链DNA，叫做退火。大量的如右图中N元素标记的DNA在变性后的退火过程中会形成                   种DNA。

（2）若对图中质粒进行改造，插入的Not I酶切位点越多，质粒的热稳定性越           。

（3）要将人乳蛋白基因插入载体，如果只允许用一种限制酶酶切载体和人乳铁蛋白基因，应选择的限制酶是                   。

（4）筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含               的培养基上进行。

（5）若从细胞中提取DNA和RNA，通过基因工程的方法，转移到另一种细胞时，转入DNA比转入RNA要有优势，理由是                      

（6）供体牛的受精卵的性染色体组成为            。在胚胎移植过程中，供、受体牛选择好后，要用激素进行同期发情处理的原因是             ，以保证移植的胚胎能够继续正常发育

（7）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用                     技术。