（8分）据报道，从部分企业生产的速冻食品中检出葡萄球菌超标，“细菌门”事件引起公众普遍关注。葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。请回答下列问题。

（1）某兴趣小组欲检测某果汁类食品中含有葡萄球菌，请帮他们完善下列步骤。

①配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨。NaCl、琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后调节PH,分装到锥形瓶后进行             ，在无菌状态下加入卵黄液（100ml10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄，振荡均匀）摇匀后立即倒平板。

②接种：取待检测果汁2.5ml加入22.5ml灭菌生理盐水中，制成接种样液。

实验组：将接种样液用                法接种在含卵黄的固体培养基上。

对照组：将                      用划线法接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作为      对照。

将上述接种后的培养皿同时放在36℃的恒温箱中培养48h。

③观察：观察培养基表面                                            

（2）培养基中的牛肉膏和蛋白胨为葡萄球菌生长和繁殖提供                 。

葡萄球菌能耐受高浓度的NaCl溶液，所以在配制培养基时加入高浓度的NaCl溶液可以将它分离出来，此培养基属于               培养基。

（3）若要统计某土壤样品中该活菌数目，宜采用                       法。

I.近期，思念、三全、湾仔码头等企业生产的速冻食品相继检出金黄色葡萄球菌超标，“细菌门”事件引起公众的普遍关注。请回答下列问题：

(1)某小组欲检测果汁类食品中是否含有金黄色葡萄球菌。经查资料：葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。请完成下列实验

步骤：

①配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后调节___________，分装到锥形瓶后___________，在无菌状态下加入卵黄液（100 mL10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄，振荡均匀）摇匀，立即倒平板。

②接种：取待检果汁2.5mL加入到22.5 mL的灭菌生理盐水中，制成接种样液。

实验组：将接种样液用___________法接种在含卵黄的固体培养基上。

对照组：将________用同样的方法接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作空白对照。

将上述接种后的培养皿同时放在36 ⁰C的恒温箱中培养48h

③观察：观察培养基表面 _______________________________________________________

(2)葡萄球菌能耐受高浓度的NaCl,所以在配制培养基时加入高浓度的NaCl可以将它分离出来。此培养基属于___________ 培养基。

(3)要统计每克果汁样品中活菌数目，宜采用___________法接种，根据果汁样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的___________就能大约推测出样品中活菌数。

Ⅱ．某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：

(1)分别配置_____________的培养基和__________的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；

(2)分别向A、B培养基接种___________；

(3)把接种后的培养基放在恒温箱中3d～4d；

(4)从A、B培养基上生长的菌落中挑取生长良好的菌株，分别接种到__________中；

(5)____________________________________________________________________________。

线虫是所有蠕虫的通称，土壤中的线虫对环境变化敏感，分布广泛，是一种土壤污染程度的指示生物。请回答有关问题：

(1)土壤线虫的食性多样化，这对促进生态系统的______________(两大重要功能），维持土壤生态系统的稳态具有重要意义。其中自由生活的线虫能促进土壤有机物的降解，这些线虫属于生态系统成分中的_____________________。

⑵若要调查线虫的种类和数量，可采用淘洗一过/帘一离心的方法分离提取线虫，然后在解剖镜下观察，对观察到的线虫进行_______。如果调查结果显示线虫的种类减少，并且能在极端条件下生存的线虫呈增多趋势，说明调查的土壤_____________________

(3)下图表示某项研究的实验结果，图中Cu50表示每公斤干土中添加50 mg的Cu²+，其他依次类推，不施加Cu²+的为对照处理。本项研究所探究的问题是______________。通过图中数据分析得出结论是_____________________

将上述接种后的培养皿同时放在36 ⁰C的恒温箱中培养48 h₀

③观察：观察培养基表面 _________________________________

(2)葡萄球菌能耐受高浓度的NaCl,所以在配制培养基时加入高浓度的NaCl可以将它分离出来。此培养基属于___________ 培养基。

(3)要统计每克果汁样品中活菌数目，宜采用___________法接种，根据果汁样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的___________就能大约推测出样品中活菌数。

（16分）目前，加酶洗衣粉中的蛋白酶主要是中温蛋白酶，最适酶活温度在50°C左右，由于日常洗涤用水的温度达不到该温度，导致蛋白酶活性受到影响。适冷蛋白酶是从适冷鱼类体内分离纯化或由深海适冷菌分泌出的酶类，最适酶活温度在20°C左右，用其作为洗衣粉添加剂可在较低的温度下达到理想的洗涤效果。下图为分离可分泌蛋白酶的适冷菌的操作步骤，
据图回答问题：

（1）在将配制好的牛肉膏蛋白胨培养基分装到三角瓶中时，为避免培养基沾到瓶口，必须使用             进行分装，并及时进行        操作。
（2）将扩大培养后的深海微生物用           法接种到含酪蛋白的固体培养基表面，在适宜条件下培养一段时间，挑出形成透明圈的菌落，即为初选出的适冷菌。
（3）为进一步检测分离出的适冷菌分泌的适冷蛋白酶的最适酶活温度，将该菌按上图所示分7组进行培养，这7组实验问形成了          ，         组所对应的温度为最适酶活温度。
（4）由操作过程可知该适冷菌的代谢类型为             。
（5）若将分离到的适冷菌接种到一定容积的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于适宜条件下振荡培养，细菌数量将呈        增长，其环境容纳量主要取决于        。

低温蛋白酶是海洋嗜冷细菌分泌的酶类，最适温度在20℃左右，作为洗衣粉添加剂可在较低的温度下达到理想的洗涤效果。下图为分离可分泌低温蛋白酶的某种嗜冷菌的操作步骤，据图回答问题：

（1）分装前，对培养基要进行___   操作。为避免杂菌污染，要及时进行      操作。

（2）将扩大培养后的深海微生物用         法接种到含酪蛋白的固体培养基表面，在适宜条件下培养一段时间，挑出形成透明圈的单一菌落，即为初选出的嗜冷菌。从嗜冷菌分泌的蛋白质中分离出低温蛋白酶的最常用的方法是____       。

（3）为进一步检测分离出的嗜冷蛋白酶的最适温度，将该菌按上图所示分5组分别置于     中进行培养，

        组所对应的温度为最适温度。

（4）为提高酶的利用率，可以采用         技术，常用的方法有            。