我国科学家成功地将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白基因转移到棉细胞内，培养出抗虫棉，在基因工程操作过程中，需要特定的限制酶切割目的基因和质粒。已知限制酶I识别序列和切点—G↓GATC—，限制酶Ⅱ识别序列和切点—↓GATC—；若在运载体质粒上有一段限制酶I的识别序列，在抗虫基因两侧各有一段限制酶Ⅱ的识别序列。下列相关叙述正确的是（　）

我国科学家成功地将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白基因转移到棉细胞内，培养出抗虫棉，在基因工程操作过程中，需要特定的限制酶切割目的基因和质粒。已知限制酶I识别序列和切点—G↓GATC—，限制酶Ⅱ识别序列和切点—↓GATC—；若在运载体质粒上有一段限制酶I的识别序列，在抗虫基因两侧各有一段限制酶Ⅱ的识别序列。下列相关叙述正确的是（　）

A．只能用同一种限制酶分别切割该质粒和目的基因

B. 用限制酶I切割质粒，用限制酶Ⅱ切割目的基因，也能形成相同的黏性末端

C．因为抗虫基因编码区与棉细胞基因不同，要使其在棉细胞内成功表达需要对其编码区进行修饰

D．该质粒上无限制酶Ⅱ的识别序列，不能被限制酶Ⅱ切割

请分析回答下列有关基因工程问题：

Ι 基因工程是按人们预先设计的蓝图，将目的基因通过一定方法导入到另一种生物的细胞中，使之产生符合人类需要的新的遗传性状或创造出新的生物类型的现代技术。

57.基因工程常用的三种工具为限制性内切酶、　　　　　　 、质粒，通常选择质粒作为“目的基因的运输载体”是由于　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

58.基因工程一般包括四步：获取目的基因；目的基因与运载体重组；　　　　　　　 ；

　　　　　　　　　 　　。

Ⅱ 在基因工程中通常需要利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR如右图示，包括三个基本反应步骤：①模板DNA的变性：模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后双链解离；②模板DNA与引 物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合形成DNA模板--引物结合物；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，合成一条新的与模板DNA 链互补的脱氧核苷酸链。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得较多的目的基因。

59.温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合形成DNA模板--引物结合物时所遵循的原则是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

60.在PCR技术中，引物的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

61.从理论上推测，第三轮循环产物中含有引物B的DNA片段所占比例为　　　　　　　　 。

62.下图表示利用PCR技术获取目的基因X的第一次循环产物。则至少需要在　　　 轮循环产物中才能开始出现独立且完整的的X基因。如果经过n次循环，则产物中①所示DNA分子数为　　　　　　 。

63.用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点。

我国科学家成功地将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白基因转移到棉细胞内，培养出抗虫棉，在基因工程操作过程中，需要特定的限制酶切割目的基因和质粒。已知限制酶I识别序列和切点—G↓GATC—，限制酶Ⅱ识别序列和切点—↓GATC—；若在运载体质粒上有一段限制酶I的识别序列，在抗虫基因两侧各有一段限制酶Ⅱ的识别序列。下列相关叙述正确的是（　）

A．只能用同一种限制酶分别切割该质粒和目的基因

B. 用限制酶I切割质粒，用限制酶Ⅱ切割目的基因，也能形成相同的黏性末端

C．因为抗虫基因编码区与棉细胞基因不同，要使其在棉细胞内成功表达需要对其编码区进行修饰

D．该质粒上无限制酶Ⅱ的识别序列，不能被限制酶Ⅱ切割