回答下列有关基因工程和克隆技术的问题。（10分）

2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

63、说出绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中用到了哪些生物工程技术？           　

利用了哪些原理？                      （本题答案从下列所给选项中选择填写）

①转基因技术；②细胞核移植技术；③胚胎移植技术；④干细胞技术；⑤动物细胞培养技术

⑥基因突变；⑦基因重组；⑧动物细胞核具有全能性；⑨动物细胞具有全能性

64、过程①②中必需用到的酶分别是                和                 。绿色荧光蛋白基因之所以能与质粒重组，原因是                                               。

65、早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及               等物质。

通过上图中过程①的方法获取目的基因的数量是有限的，要获得大量的绿色荧光蛋白基因可以利用PCR技术。PCR扩增反应（如下图所示）中加入的TaqDNA聚合酶能在接近沸点的条件下，发挥延伸DNA子链的作用，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。请回答：

PCR（DNA聚合酶链式反应）技术示意图：

66、你认为TaqDNA聚合酶一定是从下列哪种生物体细胞中分离提取的？        

A．水母细胞         B．猪胎儿成纤维细胞   　C．极端嗜热菌     D．大肠杆菌

67、下面的表达式不能反映TaqDNA聚合酶的功能，为什么？                           。

68、用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点和标出碱基对数。（2分）

（16分）请回答下列问题：
Ⅰ.疫苗对预防传染病具有重要意义。以下是制备禽流感疫苗的方案之一：

（1）此种方案中应用了         技术。步骤①所代表的过程是         ，需要       酶。步骤②需使用              酶和               酶。步骤③可用          处理大肠杆菌，以增加大肠杆菌细胞壁的通透性。以上①②③④步骤中涉及碱基互补配对的步骤是          
     。检验Q蛋白的免疫反应特性，可用 Q蛋白与禽流感康复的鸡的血清中的           进行特异性反应试验。
（2）对于现在很多国家大范围流行的甲型H1N1流感，有人建议接种人流感疫苗，接种人流感疫苗能够预防甲型H₁N₁流感的条件之一是：甲型H1N1病毒和人流感病毒具有相同的       。
（3）下面是在上述过程中用到的四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示同一种限制性内切酶的酶切位点。下列有关叙述正确的是（    ）
_{w.@w.w.k.&s.5*u.c.o~m}
A．基因amp和tet是一对等位基因，常作为基因工程中的标记基因
B．质粒指细菌细胞中能自我复制的小型环状的DNA和动植物病毒的DNA
C．限制性内切酶的作用部位是DNA分子中特定的两个核苷酸之间的氢键
D．用质粒4将目的基因导入大肠杆菌，该菌不能在含四环素的培养基上生长
（4）目前临床上对乙肝病毒（HBV）感染的检测主要有两类：血清标志物检测和病毒核酸检测。后者检测方法是利用DNA分子杂交的原理，直接检查血液中的      ，该方法具有更高的特异性和敏感性。
Ⅱ. 下图是生活在适宜环境中的C₃植物光合作用部分过程图解，其中A、B、C表示三种化合物，a、b表示两个生理过程。

（1）该过程发生的场所在叶绿体的         。
（2）C物质既可以作为b过程的还原剂，又为b过程进行提供           。
（3）形成ATP和C物质时需要的能量是由                       将光能转换成的电能。
（4）若将植物突然转移到高温、强光照、干燥的环境中，叶片气孔将逐渐关闭，此时叶肉细胞内B物质含量的变化是               。
（5）将该植物的一叶片置于恒温的密闭小室内，在适宜的CO₂浓度、光照条件下测定叶片光合作用的强度（以CO₂的吸收速率表示），测定结果如下图，若降低光照强度后重新测定，请在原图中用虚线表示出最可能的测定结果（注：参考原曲线中的a、b点标出新曲线中的a’b’点）。_{w.@w.w.k.&s.5*u.c.o~m}

请回答下列问题：

Ⅰ.疫苗对预防传染病具有重要意义。以下是制备禽流感疫苗的方案之一：

（1）此种方案中应用了          技术。步骤①所代表的过程是          ，需要        酶。步骤②需使用               酶和                酶。步骤③可用           处理大肠杆菌，以增加大肠杆菌细胞壁的通透性。以上①②③④步骤中涉及碱基互补配对的步骤是          

      。检验Q蛋白的免疫反应特性，可用 Q蛋白与禽流感康复的鸡的血清中的            进行特异性反应试验。

（2）对于现在很多国家大范围流行的甲型H1N1流感，有人建议接种人流感疫苗，接种人流感疫苗能够预防甲型H₁N₁流感的条件之一是：甲型H1N1病毒和人流感病毒具有相同的        。

（3）下面是在上述过程中用到的四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示同一种限制性内切酶的酶切位点。下列有关叙述正确的是（     ）

_{w.@w.w.k.&s.5*u.c.o~m}

A．基因amp和tet是一对等位基因，常作为基因工程中的标记基因

B．质粒指细菌细胞中能自我复制的小型环状的DNA和动植物病毒的DNA

C．限制性内切酶的作用部位是DNA分子中特定的两个核苷酸之间的氢键

D．用质粒4将目的基因导入大肠杆菌，该菌不能在含四环素的培养基上生长

（4）目前临床上对乙肝病毒（HBV）感染的检测主要有两类：血清标志物检测和病毒核酸检测。后者检测方法是利用DNA分子杂交的原理，直接检查血液中的       ，该方法具有更高的特异性和敏感性。

Ⅱ. 下图是生活在适宜环境中的C₃植物光合作用部分过程图解，其中A、B、C表示三种化合物，a、b表示两个生理过程。

（1）该过程发生的场所在叶绿体的          。

（2）C物质既可以作为b过程的还原剂，又为b过程进行提供            。

（3）形成ATP和C物质时需要的能量是由                        将光能转换成的电能。

（4）若将植物突然转移到高温、强光照、干燥的环境中，叶片气孔将逐渐关闭，此时叶肉细胞内B物质含量的变化是                。

（5）将该植物的一叶片置于恒温的密闭小室内，在适宜的CO₂浓度、光照条件下测定叶片光合作用的强度（以CO₂的吸收速率表示），测定结果如下图，若降低光照强度后重新测定，请在原图中用虚线表示出最可能的测定结果（注：参考原曲线中的a、b点标出新曲线中的a’b’点）。_{w.@w.w.k.&s.5*u.c.o~m}

（6分）Ⅰ．血糖浓度是人体健康状况的重要指标之一，多种激素参与血糖浓度的调节。
（1）血糖浓度的正常范围是          mg/dL。胰岛素分泌不足引起的糖尿
病患者由于         发生障碍，体内脂肪和蛋白质分解加强，导致机
体消瘦。血糖含量过低导致惊厥和昏迷时，应及时给患者静脉输入   
          以缓解症状。
（2）下图中，三条曲线分别表示进食后血液中胰岛素和胰高血糖素相对含量的变化。其中表示糖尿病患者胰岛素变化趋势的是曲线     ，表示健康人胰高血糖素变化趋势的是曲线       。

（3）体检时，测量血糖应在空腹时进行，其生理学理由是排除进食后                  的干扰。
Ⅱ．（8分）萤火虫能发光是因为萤火虫体内通过荧光素酶催化的系列反应所产生的现象。如果荧光素酶存在于植物体内，也可使植物体发光。一直以来，荧光素酶的唯一来源是从萤火虫腹部提取。但加利福尼亚大学的一组科学家成功地通过转基因工程将荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内，并在大肠杆菌体内生产荧光素酶。请你根据已有的知识回答下列有关问题：
（1）在此转基因工程中，目的基因是                ，提取目的基因的途径通常有两条，提取该目的基因的途径最可能是                    。
（2）将此目的基因导入到大肠杆菌体内需要运载体的帮助。下列选项是选取运载体的时候必须考虑的有                。
A．能够在宿主细胞内复制并稳定保存                B．具有特定的限制酶切点
C．具有与目的基因相同的碱基片断                  D．具有某些标记基因
（3）下列可作为受体细胞的生物有          。
A．土壤农杆菌         B．结核杆菌        C．噬菌体          D．枯草杆菌
（4）在此转基因工程中，常用质粒作为运载体；在将体外重组DNA导入大肠杆菌体内之前通常要用           处理大肠杆菌，目的是                      ，使重组基因能够导入受体细胞。（5）由于荧光素酶的特殊作用，人们一直设想将其基因作为实验工具，将它和某一基因连接在一起，通过植物是否发光来确定该基因是否已经转入到植物体内，如判断固氮基因是否成功导入某植物体内。正常根瘤菌体内的固氮基因与萤火虫体内的荧光素酶基因相比，除了碱基对的顺序、数目不同以外，在结构方面还存在不同点，主要不同是                                ，而荧光素酶基因的编码区是间隔、不连续的。
（6）与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是                  
                                                                。

（6分）Ⅰ．血糖浓度是人体健康状况的重要指标之一，多种激素参与血糖浓度的调节。

（1）血糖浓度的正常范围是           mg/dL。胰岛素分泌不足引起的糖尿

病患者由于          发生障碍，体内脂肪和蛋白质分解加强，导致机

体消瘦。血糖含量过低导致惊厥和昏迷时，应及时给患者静脉输入    

           以缓解症状。

（2）下图中，三条曲线分别表示进食后血液中胰岛素和胰高血糖素相对含量的变化。其中表示糖尿病患者胰岛素变化趋势的是曲线      ，表示健康人胰高血糖素变化趋势的是曲线        。

（3）体检时，测量血糖应在空腹时进行，其生理学理由是排除进食后                   的干扰。

Ⅱ．（8分）萤火虫能发光是因为萤火虫体内通过荧光素酶催化的系列反应所产生的现象。如果荧光素酶存在于植物体内，也可使植物体发光。一直以来，荧光素酶的唯一来源是从萤火虫腹部提取。但加利福尼亚大学的一组科学家成功地通过转基因工程将荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内，并在大肠杆菌体内生产荧光素酶。请你根据已有的知识回答下列有关问题：

（1）在此转基因工程中，目的基因是                 ，提取目的基因的途径通常有两条，提取该目的基因的途径最可能是                     。

（2）将此目的基因导入到大肠杆菌体内需要运载体的帮助。下列选项是选取运载体的时候必须考虑的有                 。

    A．能够在宿主细胞内复制并稳定保存                 B．具有特定的限制酶切点

    C．具有与目的基因相同的碱基片断                   D．具有某些标记基因

（3）下列可作为受体细胞的生物有           。

A．土壤农杆菌          B．结核杆菌         C．噬菌体           D．枯草杆菌

（4）在此转基因工程中，常用质粒作为运载体；在将体外重组DNA导入大肠杆菌体内之前通常要用            处理大肠杆菌，目的是                       ，使重组基因能够导入受体细胞。（5）由于荧光素酶的特殊作用，人们一直设想将其基因作为实验工具，将它和某一基因连接在一起，通过植物是否发光来确定该基因是否已经转入到植物体内，如判断固氮基因是否成功导入某植物体内。正常根瘤菌体内的固氮基因与萤火虫体内的荧光素酶基因相比，除了碱基对的顺序、数目不同以外，在结构方面还存在不同点，主要不同是                                 ，而荧光素酶基因的编码区是间隔、不连续的。

（6）与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是                  

                                                                 。